电针血清对β淀粉样蛋白损伤原代培养大鼠海马神经元的保护作用(2)
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参见附件。
Caspase-3免疫细胞化学染色：取出细胞培养板，免疫染色固定液固定细胞20 min，0.01 mol/L PBS洗涤3次，加入免疫染色封闭液，在37 ℃条件下孵育30 min，加入抗Caspase-3兔单克隆抗体，在4 ℃条件下孵育过夜，用PBS浸洗细胞3次，加入FITC-羊抗兔IgG，在37 ℃条件下孵育1 h，PBS洗涤3次，加入Hoechst 33342室温染色10 min，经PBS充分清洗后，缓冲甘油封片后荧光显微镜下观察并计数阳性细胞个数。
3 统计学方法
采用SPSS15.0统计软件进行分析。数据以—x±s表示，组间比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
4 结果
4.1 海马神经元的培养与鉴定
接种后24 h，在倒置显微镜下可见全部细胞已贴壁，且伸出短小的突起。培养7 d后神经元胞体饱满，多呈梭形、锥形，少数呈多边形，细胞的突起进一步增多增长，大部分神经元有2～5个突起，形成神经元网络(见图1)。免疫细胞化学染色显示，培养7 d的大鼠海马神经元NSE和MAP-2抗体标记阳性(见图2)。NSE和MAP-2双标阳性细胞数达90%左右。
4.2 电针血清对神经元增殖的影响
MTT检测结果发现，与正常组比较，模型组细胞活力显著下降(P<0.01)，而电针血清组与模型组比较，细胞增殖能力明显增强，差异有统计学意义(P<0.01)。见图3。
4.3 电针血清对神经元存活的影响
经Aβ处理48 h后，细胞发生明显凋亡，部分细胞从皿底脱落，甚至漂浮；与模型组比较，电针血清组凋亡细胞数明显减少(见图4)。通过计数200倍视野下TUNEL阳性细胞个数，经统计学分析发现，模型组和电针血清组凋亡细胞数目显著增多，与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01)，而电针血清组与模型组比较，凋亡细胞数目明显减少(P<0 ......
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