2.4 蛋白定量

    使用BCA蛋白定量试剂盒，按照说明书进行操作。在酶标仪测定590 nm处吸光度，把实验数据转入到统计软件STATISTICA 6.0中绘制回归直线，并计算回归方程，计算出各个样品的蛋白浓度，按照25 ?g或50 ?g蛋白分装，加入等体积的2倍上样缓冲液，煮沸变性5 min后，立即上样，或放置-70 ℃冰箱中保存。

    2.5 SDS-PAGE电泳

    按照说明配制7.5%、10%、15%的SDS-PAGE胶，凝固后按照说明安装电泳装置，加入电泳缓冲液后取下梳子，分别取各组蛋白样品和预染的蛋白Marker于80 V进行SDS电泳，进入分离胶后电压升至120 V。电泳完毕后打开玻璃板，取下胶，用于Western Blot检测。

    2.6 蛋白质印迹法检测

    电泳后根据预染Marker的位置，判断目的蛋白在胶上的位置，在合适范围内将胶切下，在转移Buffer中浸泡至少15 min，依照胶的范围分别剪下大小与胶一致的6张滤纸及PVDF膜 ......