四妙勇安汤合生脉饮对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响(2)
2.6 流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染法检测心肌细胞凋亡
将细胞接种于6孔培养板中，每孔2 mL，细胞密度为1×106/mL，参照上述缺氧/复氧模型的建立及实验分组分别建立6孔板中缺氧模型并进行实验分组。每组2孔细胞，即一个样本，重复3次实验。结合AnnexinⅤ-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒的操作，上流式细胞仪检测。
3 统计学方法
采用SPSS13.0统计软件进行分析。实验数据用—x±s表示，组间比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
4 结果(见表1、表2)
5 讨论
近20年，细胞凋亡涉及各个研究领域，已成为科研人员研究的一个热点内容。心肌细胞凋亡参与了缺氧、缺血后再灌注引起的心肌损伤，研究心肌细胞凋亡有可能为临床治疗缺血缺氧性心脏病提供新的思路和方法。
MTT比色法可用于研究心肌细胞的存活力，是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT法的原理是活细胞线粒体含有的琥珀酸脱氢酶能够还原外源性的黄色MTT为不溶于水的紫蓝色沉淀物，这种沉淀物被称之为甲臜(Formazan)并沉积于细胞中，但是死亡细胞则没有此种反应。在一定细胞数范围内，甲臢的形成量与活细胞数量成正比，甲臢形成量能够间接反映细胞的存活力。二甲基亚砜能溶解细胞中的沉淀物甲瓒，在酶标仪上选择波长490 nm处来检测这种物质的光吸收值，从而间接地相对地反映存活状态的心肌细胞的数量，也就能够反应细胞的存活力。本实验结果表明，四妙勇安汤合生脉饮醇沉药液具有增加缺氧/复氧损伤后心肌细胞存活力的作用。
Annexin V-FITC/PI双染法是流式细胞术中常用的定量检测细胞凋亡的方法之一。本实验采用AnnexinⅤ与PI双染法可以将活细胞、早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞、坏死细胞、损伤细胞区别开来，经流式细胞术检测统计分析得出细胞凋亡率。本实验结果表明，在正常心肌细胞中存在心肌细胞凋亡，在缺氧复氧损伤后，模型组心肌细胞凋亡增多，细胞凋亡率上升，在加入四妙勇安汤合生脉饮后心肌细胞凋亡率下降。由此可以得出，该醇沉药液可以对缺氧/复氧后心肌细胞的凋亡起到保护作用，减少缺氧/复氧后细胞凋亡的数量。实验结果表明，四妙勇安汤合生脉饮对心肌细胞凋亡具有保护作用，但是其机制还有待进一步研究。
参考文献：
[1] 刘真，于慧卿，魏运湘，等.四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞的影响[J].中国中医药信息杂志，2010，17(5)：31-33.
[2] 朱寅圣.四妙勇安汤合生脉饮治疗冠心病120例[J].时珍国医国药， 2007，18(11)：2824.
[3] 张淑芹，范志涛，刘翠文.四妙勇安汤合失笑散治疗急性心肌梗死疗效观察[J].中西医结合心脑血管病杂志，2013，11(5)：535-537.
[4] 张丽娜，金国琴，郭炜，等.原代乳鼠心肌细胞的培养方法[J].中药药理与临床，2010，26(5)：148-150.
[5] Song G， He L， Wang B， et al. Astragalus injection exerts antireperfusion injury through ERK1/2 pathway in cultured cardiac myocytes[J]. Chin J ECC，2008，6(1)：52-54.
(收稿日期：2013-08-12，编辑：华强), http://www.100md.com(于慧卿等)
将细胞接种于6孔培养板中，每孔2 mL，细胞密度为1×106/mL，参照上述缺氧/复氧模型的建立及实验分组分别建立6孔板中缺氧模型并进行实验分组。每组2孔细胞，即一个样本，重复3次实验。结合AnnexinⅤ-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒的操作，上流式细胞仪检测。
3 统计学方法
采用SPSS13.0统计软件进行分析。实验数据用—x±s表示，组间比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
4 结果(见表1、表2)
5 讨论
近20年，细胞凋亡涉及各个研究领域，已成为科研人员研究的一个热点内容。心肌细胞凋亡参与了缺氧、缺血后再灌注引起的心肌损伤，研究心肌细胞凋亡有可能为临床治疗缺血缺氧性心脏病提供新的思路和方法。
MTT比色法可用于研究心肌细胞的存活力，是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT法的原理是活细胞线粒体含有的琥珀酸脱氢酶能够还原外源性的黄色MTT为不溶于水的紫蓝色沉淀物，这种沉淀物被称之为甲臜(Formazan)并沉积于细胞中，但是死亡细胞则没有此种反应。在一定细胞数范围内，甲臢的形成量与活细胞数量成正比，甲臢形成量能够间接反映细胞的存活力。二甲基亚砜能溶解细胞中的沉淀物甲瓒，在酶标仪上选择波长490 nm处来检测这种物质的光吸收值，从而间接地相对地反映存活状态的心肌细胞的数量，也就能够反应细胞的存活力。本实验结果表明，四妙勇安汤合生脉饮醇沉药液具有增加缺氧/复氧损伤后心肌细胞存活力的作用。
Annexin V-FITC/PI双染法是流式细胞术中常用的定量检测细胞凋亡的方法之一。本实验采用AnnexinⅤ与PI双染法可以将活细胞、早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞、坏死细胞、损伤细胞区别开来，经流式细胞术检测统计分析得出细胞凋亡率。本实验结果表明，在正常心肌细胞中存在心肌细胞凋亡，在缺氧复氧损伤后，模型组心肌细胞凋亡增多，细胞凋亡率上升，在加入四妙勇安汤合生脉饮后心肌细胞凋亡率下降。由此可以得出，该醇沉药液可以对缺氧/复氧后心肌细胞的凋亡起到保护作用，减少缺氧/复氧后细胞凋亡的数量。实验结果表明，四妙勇安汤合生脉饮对心肌细胞凋亡具有保护作用，但是其机制还有待进一步研究。
参考文献：
[1] 刘真，于慧卿，魏运湘，等.四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞的影响[J].中国中医药信息杂志，2010，17(5)：31-33.
[2] 朱寅圣.四妙勇安汤合生脉饮治疗冠心病120例[J].时珍国医国药， 2007，18(11)：2824.
[3] 张淑芹，范志涛，刘翠文.四妙勇安汤合失笑散治疗急性心肌梗死疗效观察[J].中西医结合心脑血管病杂志，2013，11(5)：535-537.
[4] 张丽娜，金国琴，郭炜，等.原代乳鼠心肌细胞的培养方法[J].中药药理与临床，2010，26(5)：148-150.
[5] Song G， He L， Wang B， et al. Astragalus injection exerts antireperfusion injury through ERK1/2 pathway in cultured cardiac myocytes[J]. Chin J ECC，2008，6(1)：52-54.
(收稿日期：2013-08-12，编辑：华强), http://www.100md.com(于慧卿等)
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