葡萄籽提取物原花青素抗氧化作用量效关系研究(1)
摘要：目的 观察葡萄籽提取物原花青素抗氧化作用的量效关系。方法 实验小鼠随机分为空白组、模型组和原花青素5 mg/kg组、15 mg/kg组、45 mg/kg组、135 mg/kg组、405 mg/kg组。模型组和各给药组小鼠腹腔注射D-半乳糖120 mg/kg制备氧化损伤模型，空白组注射等体积生理盐水溶液，造模期间各组动物给予相应药物，连续造模7周。给药结束后，测定血清中丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性，观察受试物的量效关系。结果 原花青素45、135、405 mg/kg剂量组可显著降低模型小鼠血清MDA水平，原花青素15、45、135、405 mg/kg剂量组血清SOD活性提高。结论 原花青素在>15 mg/kg剂量时对小鼠D-半乳糖氧化损伤模型显示出较好的抗氧化活性，提示临床应保证一定的服用剂量以发挥较好的抗氧化功效。
关键词：葡萄籽；原花青素；D-半乳糖；抗氧化；量效关系；小鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.12.014
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2013)12-0037-03
葡萄籽为葡萄科葡萄属葡萄(Vitis vinifera L.)的种子，在食品工业中是葡萄相关加工产品的废弃部分。但近些年来，随着研究的不断深入，发现葡萄籽具有很高的营养价值和药用价值，其中所含的原花青素(proanthocyanidin)为葡萄籽生物
活性的重要成分之一[1]。原花青素是葡萄中最主要的多酚类物质，因在酸性介质中加热产生红色的花青素而得名。葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidin extract，GSPE)是由儿茶素、表儿茶素及其没食子酸酯通过C4-C6或C4-C8键共价相连组成的多聚体。由于这类物质的分子中具有多电子的羟基部分，使它拥有较强的抗氧、清除自由基的能力[2]。
随着人们对GSPE生物活性的深入研究，GSPE作为天然抗
氧化剂所具有的多项保健功能已得到多方面的证实。近年来GSPE已成为我国保健食品中的一种常用原料[3]。但目前GSPE人体应用存在有效剂量不明确等突出问题，这给以GSPE为原料的保健食品研发和审评带来了困扰和盲目性。从减少资源利用和节约成本、动物代替等角度，本研究以D-半乳糖所致小鼠氧化损伤模型为切入点，观察GSPE对氧化损伤的影响，进而探讨其抗氧化功能的量效关系，为临床人体使用提供实验数据。
1 材料与方法
1.1 动物
ICR小鼠，SPF级，雄性，体质量18～22 g，购自北京大学医学部实验动物科学部，动物许可证号：SCXK(京)2006-0008。
1.2 药物
葡萄籽原花青素，批号1104009-18，含量99.82%，天津市尖峰天然产物研究开发有限公司。
1.3 试剂与仪器
D-半乳糖，Sigma-Aldrich，货号0637。丙二醛(MDA)测定试剂盒，批号20111227，南京建成生物工程研究所。超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒，批号20111222，南京建成生物工程研究所。Sartorious BT 124S电子精密天平[赛多利斯科学仪器(北京)有限公司]；半自动生化测定仪(Microlab 300，Vital Scientific Inc.)；IKA MS 3数字振荡器，德国；Sigma 3K15、1-15PK离心机，德国。
1.4 分组、造模与给药
将小鼠按体质量随机分为7组：空白组、模型组和原花青素5 mg/kg组、15 mg/kg组、45 mg/kg组、135 mg/kg组、405 mg/kg组，每组12只。模型组及各给药组小鼠腹腔注射D-半乳糖120 mg/kg(0.1 mL/10 g体质量)制备氧化损伤模型，空白组注射等体积生理盐水溶液[4-5]。
造模开始给予不同剂量GSPE，每日灌胃给药1次，连续给药7周，空白组和模型组予等体积蒸馏水，灌胃体积为20 mL/kg。按照给药剂量和灌胃体积，用蒸馏水分别将GSPE配制成相应0.025%、0.075%、0.225%、0.675%、2.025%浓度水溶液，4 ℃，棕色瓶避光贮存。
1.5 指标测定
末次给药前实验动物禁食不禁水16 h，末次给药后1 h，各组小鼠眼眶后静脉丛取血，离心取血清。采用MDA和SOD试剂盒测量血清中MDA含量和SOD活性。
1.6 统计学方法
采用SPSS10.0统计软件进行分析，实验数据用—x±s表示，采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
模型组血清MDA含量显著升高，与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较，原花青素45、135、405 mg/kg剂量组可显著降低模型小鼠血清MDA水平(P<0.05，P<0.01)。模型组血清SOD活性显著降低，与空白组比较差异有统计学意义(P<0.001)。与模型组比较，原花青素15、45、135、405 mg/kg剂量组可显著升高模型小鼠血清SOD活性(P<0.001)。结果见表1。
3 讨论
原花青素在自然界中广泛存在，具有很强的抗氧化和清除自由基活性。据报道，其抗氧化能力是维生素E的50倍、维生素C的20倍，是迄今为止发现的最好的天然抗氧化剂之一[6-7]。植物果实中原花青素含量相对较高，其中葡萄籽原花青素在质量和含量上均比较突出。由于鲜食葡萄籽资源比较分散而酿酒葡萄籽资源比较集中，因而适宜作原花青素的原料[8]。葡萄籽原花青素具有广泛的生物活性，研究表明，葡萄籽原花青素除了具有显著的抗氧化和清除自由基活性以外，还具有抗炎、抗肿瘤、保护缺血性脑组织损伤、降血脂等作用[9-14]。, 百拇医药(解素花等)
关键词：葡萄籽；原花青素；D-半乳糖；抗氧化；量效关系；小鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.12.014
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2013)12-0037-03
葡萄籽为葡萄科葡萄属葡萄(Vitis vinifera L.)的种子，在食品工业中是葡萄相关加工产品的废弃部分。但近些年来，随着研究的不断深入，发现葡萄籽具有很高的营养价值和药用价值，其中所含的原花青素(proanthocyanidin)为葡萄籽生物
活性的重要成分之一[1]。原花青素是葡萄中最主要的多酚类物质，因在酸性介质中加热产生红色的花青素而得名。葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidin extract，GSPE)是由儿茶素、表儿茶素及其没食子酸酯通过C4-C6或C4-C8键共价相连组成的多聚体。由于这类物质的分子中具有多电子的羟基部分，使它拥有较强的抗氧、清除自由基的能力[2]。
随着人们对GSPE生物活性的深入研究，GSPE作为天然抗
氧化剂所具有的多项保健功能已得到多方面的证实。近年来GSPE已成为我国保健食品中的一种常用原料[3]。但目前GSPE人体应用存在有效剂量不明确等突出问题，这给以GSPE为原料的保健食品研发和审评带来了困扰和盲目性。从减少资源利用和节约成本、动物代替等角度，本研究以D-半乳糖所致小鼠氧化损伤模型为切入点，观察GSPE对氧化损伤的影响，进而探讨其抗氧化功能的量效关系，为临床人体使用提供实验数据。
1 材料与方法
1.1 动物
ICR小鼠，SPF级，雄性，体质量18～22 g，购自北京大学医学部实验动物科学部，动物许可证号：SCXK(京)2006-0008。
1.2 药物
葡萄籽原花青素，批号1104009-18，含量99.82%，天津市尖峰天然产物研究开发有限公司。
1.3 试剂与仪器
D-半乳糖，Sigma-Aldrich，货号0637。丙二醛(MDA)测定试剂盒，批号20111227，南京建成生物工程研究所。超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒，批号20111222，南京建成生物工程研究所。Sartorious BT 124S电子精密天平[赛多利斯科学仪器(北京)有限公司]；半自动生化测定仪(Microlab 300，Vital Scientific Inc.)；IKA MS 3数字振荡器，德国；Sigma 3K15、1-15PK离心机，德国。
1.4 分组、造模与给药
将小鼠按体质量随机分为7组：空白组、模型组和原花青素5 mg/kg组、15 mg/kg组、45 mg/kg组、135 mg/kg组、405 mg/kg组，每组12只。模型组及各给药组小鼠腹腔注射D-半乳糖120 mg/kg(0.1 mL/10 g体质量)制备氧化损伤模型，空白组注射等体积生理盐水溶液[4-5]。
造模开始给予不同剂量GSPE，每日灌胃给药1次，连续给药7周，空白组和模型组予等体积蒸馏水，灌胃体积为20 mL/kg。按照给药剂量和灌胃体积，用蒸馏水分别将GSPE配制成相应0.025%、0.075%、0.225%、0.675%、2.025%浓度水溶液，4 ℃，棕色瓶避光贮存。
1.5 指标测定
末次给药前实验动物禁食不禁水16 h，末次给药后1 h，各组小鼠眼眶后静脉丛取血，离心取血清。采用MDA和SOD试剂盒测量血清中MDA含量和SOD活性。
1.6 统计学方法
采用SPSS10.0统计软件进行分析，实验数据用—x±s表示，采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
模型组血清MDA含量显著升高，与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较，原花青素45、135、405 mg/kg剂量组可显著降低模型小鼠血清MDA水平(P<0.05，P<0.01)。模型组血清SOD活性显著降低，与空白组比较差异有统计学意义(P<0.001)。与模型组比较，原花青素15、45、135、405 mg/kg剂量组可显著升高模型小鼠血清SOD活性(P<0.001)。结果见表1。
3 讨论
原花青素在自然界中广泛存在，具有很强的抗氧化和清除自由基活性。据报道，其抗氧化能力是维生素E的50倍、维生素C的20倍，是迄今为止发现的最好的天然抗氧化剂之一[6-7]。植物果实中原花青素含量相对较高，其中葡萄籽原花青素在质量和含量上均比较突出。由于鲜食葡萄籽资源比较分散而酿酒葡萄籽资源比较集中，因而适宜作原花青素的原料[8]。葡萄籽原花青素具有广泛的生物活性，研究表明，葡萄籽原花青素除了具有显著的抗氧化和清除自由基活性以外，还具有抗炎、抗肿瘤、保护缺血性脑组织损伤、降血脂等作用[9-14]。, 百拇医药(解素花等)
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