不同工艺提取的竹节参皂苷粗提物毒性及其抗炎作用初步研究(2)
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参见附件。
2.3 RAW264.7细胞活力测定
将RAW264.7接种于96孔板,细胞数为105个/mL,每孔100 μL,贴壁后,设置调零孔(只有培养液)、正常组、给药组,给药浓度为5、10、20、40、80 μg/mL,每组4个复孔,24 h后吸取上清液,在每孔中加入含MTT的培养液,继续培养4 h,然后将上清去掉,每孔加入150 μL DMSO,置摇床上低速震荡10 min,使结晶充分溶解,在酶联免疫检测仪490 nm处测量各孔吸光度。
2.4 RAW264.7细胞一氧化氮释放量测定
将RAW264.7接种96孔板,细胞数为105个/mL,每孔100 μL,贴壁后,同时加入不同提取工艺的竹节参皂苷(浓度为10、1 μg/mL)和1 μg/mL LPS作用,设为空白组、LPS组、LPS+竹节参皂苷组,每组4个复孔,24 h后,取上清液50 μL,依次加入GriessⅠ和GriessⅡ各50 μL,37 ℃恒温箱中反应30 min,在酶联免疫检测仪540 nm处测量各孔吸光度。
3 统计学方法
采用SPSS13.0统计软件进行分析。所有数据均以—x±s表示,采用方差分析进行多组间差异比较,以Dunnett-t检验比较两组间均数的差异。P<0.05表示差异有统计学意义。
4 结果
4.1 不同提取工艺竹节参皂苷粗提物对RAW264.7细胞活力的影响
形态学观察正常组的细胞呈圆形;与正常组比较,样品1和样品2的药物浓度在40 μg/mL以下时对细胞形体无显著影响;浓度达到40 μg/mL时细胞明显肿胀变大,细胞膜逐渐模糊 ......
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