芪龙头痛颗粒镇痛作用实验研究(2)
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参见附件。
2.4 血浆降钙素基因相关肽、β-内啡肽检测
下腔静脉取血2 mL，放入含30 ?L 7.5%EDTA和40 ?L抑肽酶的EP管中，4 ℃、3000 r/min离心10 min，取上清液存于-20 ℃冰箱待测。按照125I-CGRP与125I-β-EP放免试剂盒说明书检测。
2.5 Fos蛋白免疫组化检测
免疫组化按ABC法步骤进行。4 μm厚的切片先在62 ℃干燥箱中加热2 h，再经二甲苯和梯度酒精脱蜡与复水，然后在pH 6.0的枸橼酸钠溶液中于700 W微波炉中抗原修复，再用3%H2O2封闭10 min，然后用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗，之后，切片用10% 山羊血清37 ℃封闭2 h，再加兔抗c-fos抗体(1∶100)4 ℃孵育16 h。PBS冲洗3遍，用生物素化山羊抗兔IgG(1∶1000)37 ℃条件下孵育30 min，PBS再冲洗3遍，用ABC液37 ℃孵育20 min，PBS再冲洗4遍，用DAB显色液显色5 min。最后，切片、脱水、透明并封片。
用PBS代替一抗检验染色特异性，结果显示切片无阳性染色。大鼠的脊髓横断面染色做阳性对照，可见脊髓前、后角都充满核染色。每只大鼠制作6个组织切片，以5个不重叠的200倍显微视野切片的4个角与中心阳性细胞表达的总和作为该张切片的Fos阳性细胞数。由此计算出每只鼠的Fos阳性表达数，再计算出各组平均阳性表达数。
3 统计学方法
采用SPSS19.0统计软件进行分析。所有实验数据用—x±s表示。热板法实验数据用一般线性模型的重复测量方法分析 ......
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