黄芪多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化的特性(2)
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1.1 动物与细胞
SPF级Wistar大鼠，体质量(120±10)g，20只，雌雄皆用，购自甘肃中医学院实验动物中心，合格证号：SCXK(甘)2004-2006-0002522号。采用全骨髓贴壁法提取大鼠原代BMSCs。
1.2 药物
黄芪购自甘肃省安宁医药公司，经甘肃中医学院中药制药中医药科研二级实验室鉴定为正品。粉碎，过20目筛，称量100 g，加入10倍量水，80 ℃下回流提取3次，每次2 h，过滤，合并滤液，浓缩后加入95%乙醇至含醇量为80%，静置过夜(4 ℃)，过滤，分离沉淀，加入适量水溶解，加95%乙醇至含醇量为80%，再静置过夜(4 ℃)，过滤，分离沉淀，加水溶解，除去蛋白(氯仿∶正丁醇=4∶1，V/V，共除20次)，加活性炭脱色，抽滤，加95%乙醇至含醇量为80%，静置过夜(4 ℃)，过滤，分离出沉淀，冷冻干燥，得多糖0.505 g，密封备用。
1.3 试剂
DMEM/F12培养基，Hyclone公司，批号NX20742；胎牛血清(FBS)，Hyclone公司，批号NWl0509；胰蛋白酶，Gibco公司，批号20120708217；噻唑蓝(MTT)，索莱宝科技有限公司，批号0793；二甲基亚砜(DMSO)，索莱宝科技有限公司，批号0231；Western及IP细胞裂解液，碧云天生物技术研究所，批号P0013；BCA蛋白定量试剂盒，索莱宝公司，批号PC0020；3-甲基-1-异丁基黄嘌呤(IBMX)，Sigma公司；转化生长因子-β2 (TGF-β2)，peprotech公司；兔抗神经特异性烯醇化酶(NSE)抗体、兔抗胶原蛋白Ⅰ、兔抗胶原蛋白Ⅱ ......
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