黄芪甲苷对高糖腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞表达 致纤维化因子的影响(2)
| 第1页 |
参见附件。
1.2主要试剂与仪器
磷酸盐缓冲液(PBS)、胎牛血清(FBS)、RPMI1640及胰蛋白酶(GIBCO公司),二甲基亚砜(DMSO,Sigma公司),含10%FBS和100 U/mL青霉素、100 最/mL链霉素的RPMI1640培养液,人TGF-β1 ELISA试剂盒(上海依科赛生物制品有限公司),人VEGF ELISA试剂盒(上海华壹生物科技有限公司),人CTGF ELISA试剂盒(上海采右实业有限公司),噻唑蓝(MTT,上海沪尚生物科技有限公司),CO2培养箱(日本SANYO),酶联免疫检测仪Model550(BIO-RAD)。
1.3药物配制
取0.02 g黄芪甲苷干粉溶于0.2 mL DMSO,配成浓度为100 mg/mL的黄芪甲苷贮存液,-20 ℃保存,临用时以RPMI1640培养液倍比稀释,使其终浓度为5、10、20、30、40、45、50 最/mL。
1.4MTT法检测细胞活性
制备单细胞悬液,接种于96孔板,细胞贴壁生长至70%～80%时加入不同浓度的黄芪甲苷,培养24 h后换成不含药物的培养基,每孔(含100 L培养基)加入浓度5 mg/mL的MTT 20 L,孵育4 h,弃上清,加入150 L DMSO,置恒温震荡器内震荡10 min,酶标仪测定各孔在490 nm处吸光度,计算细胞活性,进一步选取适合实验的药物浓度。每个药物浓度4个复孔,实验重复3次。
1.5细胞培养与分组
将单细胞悬液接种于25 cm2的培养瓶中,用10%FBS培养液于37 ℃、5%CO2培养箱内孵育,2～3 d换液1次。当第5～20代之内的细胞生长融合至单层达到培养瓶底的80%～90%时进行实验。实验随机分为空白组(10%FBS培养液2 mL)、模型组(4.25%PDS 1.5 mL和10%FBS培养液0 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。