艾烟可吸入颗粒物对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响(2)
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1.2艾条
3年蕲艾条,南阳汉医艾绒有限责任公司生产。
1.3主要试剂与仪器
高糖DMEM培养基粉剂,美国Gibco公司；胰蛋白酶(Trypsin)、二甲基亚砜(DMSO),美国Sigma公司；胎牛血清(FBS),美国Hychone公司；TransAMTM核因子(NF)-κB p65试剂盒,美国Active Motif公司；细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒、Hoechest33258染料、苯*****(PMSF),上海碧云天生物技术公司；碘化丙啶(PI)染料,美国Sigma公司；Ca2+探针、活性氧(ROS)探针(DCFH-DA粉剂),美国Sigma公司；荧光显微镜,日本Olympus公司；酶标仪,美国Bio-Rad公司；Thermo Scientific Multiskan GO全波长读数仪/超微量分光光度计,美国Thermo Scientific公司；Mini VolTM PM10便携式空气采样器：美国Mini Vol公司；6孔培养板、60 mm培养皿,美国Corning公司；Whatman剑桥滤片(直径44 mm)；英国沃特曼(Whatman)公司,不透明96孔白板Cliniplate,美国Thermo公司；自制艾烟PM10采样玻璃箱。
2实验方法
2.1主要溶液的制备
2.1.1艾烟PM10原溶液撕下包裹艾条的棉纸,将其中的艾绒置于玻璃箱中点燃,将Mini VolTM PM10便携式采样器放入玻璃箱中,用剑桥滤片进行采样,流量5 L/min。采样前后剑桥滤片的质量差即为艾烟PM10的质量。用适量DMSO溶解剑桥滤片上的PM10,制成终浓度为40 mg/mL的艾烟PM10原溶液,0.22 μm滤器过滤除菌,避光存储于-80 ℃备用。每次实验前用培养液稀释至所需浓度(DMSO浓度≤1%)。
2.1.2活性氧探针溶液将3.5 mg DCFH-DA粉剂溶解于721 μL乙醇中(浓度为10 ......
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