竹节参总皂苷对四氯化碳诱导小鼠肝损伤的影响(2)
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1.3 药物及制备
竹节参购于湖北恩施竹节参种植基地，经三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室鉴定为五加科人参属植物竹节参Panax japonicus C.A.Mey.的干燥根茎。将竹节参粉碎成粗粉，取竹节参粗粉，按料液比1∶10加入60%乙醇溶液，先浸泡2 h，加热回流提取3次，合并滤液，得提取液，将提取液减压浓缩致无醇味，加适量水放置，离心，取上清液，用正丁醇萃取，减压浓缩得正丁醇浸膏。取浸膏溶于水，过D101大孔树脂，依次用水和30%、60%、90%乙醇冲洗。取60%洗脱部位，经硅胶柱层析分离，采用三氯甲烷-甲醇梯度洗脱，即得竹节参总皂苷。
1.4 主要试剂与仪器
CCl4、二甲基亚砜(DMSO)，广东光华化学有限公司；反转录试剂盒，Thermo公司。梯度PCR仪(Germany)， ECLIPSE TE2000-S倒置荧光显微镜(日本尼康)，Gel logic 200凝胶成像分析系统(美国柯达)，DU730核酸蛋白分析仪(美国贝克曼库尔特公司)。
2 实验方法
2.1 体外培养
培养肝癌细胞HepG2，采用胰酶消化传代，以每孔10 000个细胞铺96孔板，细胞贴壁生长状况较好时加药物预保护6 h，然后加CCl4 10 mmol/L，建立体外细胞损伤模型。因只有活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶才能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒，并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。DMSO能溶解细胞中的甲瓒，24 h后加MTT 20 μL (5 mg/mL)，4～6 h后弃掉废液，加DMSO溶解，在酶标仪490 nm波长处测OD值，确定细胞存活状况。计算细胞存活率(%)
[(药物组―模型组)/(正常组―模型组)×100%]。
2.2 体内实验
2.2.1 造模、分组与给药 取Balb/c小鼠36只，随机分为正常组、模型组、药物组(100 mg/kg)，每组12只。于第2、5、8日参照文献[1]方法 ......
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