脱氢紫堇碱对高糖培养心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响(2)
| 第1页 |
参见附件。
1.2 药物
DHC对照品(北京鑫方程生物公司，批号120930， 20 mg)，卡托普利对照品(中国食品药品检定研究院，批号100318-201103，100 mg)。
1.3 主要试剂与仪器
胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、四甲基偶氮唑盐(MTT)均为Sigma公司进口分装产品，DNA PREP试剂盒(库尔特公司)，Ⅰ型、Ⅲ型胶原ELISA试剂盒(USCN公司)，小鼠抗波形蛋白单克隆抗体和小鼠抗结蛋白单克隆抗体(Biogenes公司)，DMEM高糖、低糖培养基和胎牛血清(FCS)均为GIBCO公司产品。流式细胞分析仪(美国BD公司)，酶联免疫分析仪(美国BioTek公司)。
2 实验方法
2.1 心肌成纤维细胞培养与鉴定
参照文献[3]方法加以改进。取出生24 h内的SD大鼠乳鼠，在无菌条件下，开胸摘取心脏，置于4 ℃、0.01%磷酸盐缓冲液中，除去红细胞，75%酒精浸泡30 s后剪成1 mm3大小的碎块，弃去0.01%磷酸盐缓冲液，加入等体积的0.125%胰蛋白酶和0.1%Ⅱ型胶原酶，37 ℃水浴振荡反复消化10 min，至组织块消失，收集每次消化悬液，10%FCS的DMEM低糖培养液终止消化，收集每次消化悬液，2000 r/min离心10 min，弃上清液，再加入10%的DMEM低糖培养液，制成细胞悬液，接种至培养瓶，置于37 ℃、5%CO2培养箱内培养。根据心肌细胞和成纤维细胞贴壁时间的不同，采用差速贴壁分离法贴壁60 min，弃上清液，剩下的为CFs，加入含10%FCS的DMEM低糖培养液继续培养。经免疫组化波形蛋白染色阳性和结蛋白染色阴性为所需的CFs，纯度达98%，台盼蓝染色细胞活力>90%。待80%～90%细胞融合后用0.25%胰酶消化传代(1∶2)，实验采用2～4代细胞。
2 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。