栓钱菌质多糖的制备、纯化及性质研究(2)
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2.1.2 斜面菌种的活化 无菌条件下将红栓菌接种于斜面培养基上，27～28 ℃培养箱中避光培养4～5 d，置4 ℃冰箱保存，备用。
2.1.3 液体菌种的制备 将活化好的斜面菌种接入液体基础培养基中，置27～28 ℃摇床140～160 r/min培养4～5 d，即得。
2.2 栓钱菌质的制备
无菌条件下在马钱子基质中接入红栓菌液体菌种，(28±1)℃培养箱中培养30 d，取出，60 ℃烘干，粉碎，过60目筛。
2.3 栓钱菌质粗多糖的制备
称取栓钱菌质粉末300 g，加10倍量水煎煮2 h，趁热过滤，药渣加8倍量水煎煮1 h，滤过，合并2次滤液，浓缩至一定体积，加入30%H2O2使H2O2浓度达10%， 50 ℃恒温水浴中脱色4 h。溶液按Sevage法脱蛋白3次，即在溶液中加入0.2倍三氯甲烷和0.04倍正丁醇溶液，振荡10 min，离心，收集上清液。上清液中加入4倍体积的95%乙醇，于4 ℃冰箱内静置24 h，离心，沉淀经无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤后，真空干燥，即得菌质粗多糖FSP-1，计算得率为10.52%。
2.4 菌质粗多糖FSP-1含量测定
2.4.1 标准曲线的制备 准确称取恒重葡萄糖10 mg，定容至100 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀至完全溶解。分别从中吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，置具塞刻度试管中，用蒸馏水稀释至2 mL，混匀，加入6%苯酚溶液1 mL，混匀后加入浓硫酸5 mL，摇匀后置沸水浴中加热15 min，再于冷水中放置20 min，冷却至室温。以0 mL试管为空白对照，于490 nm波长处测定吸光度。
2.4.2 样品含量测定 精密称取菌质粗多糖FSP-1 24.97 mg，加适量水超声溶解，并定容至50 mL容量瓶中，制得浓度为0.499 4 mg/mL的粗多糖水溶液。分别从中吸取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，按标准曲线操作，于490 nm波长处测定吸光度。以葡萄糖质量(mg)为横坐标，吸光度为纵坐标，得标准曲线方程Y=8.2X-0.018 7，r=0.998 3(n=6)。计算菌质粗多糖FSP-1中平均糖含量为47 ......
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