番荔枝内酯对肺腺癌A549细胞周期及凋亡的影响(2)
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参见附件。
2.3 流式细胞仪检测A549细胞凋亡
按“2.2”项下方法培养后分为10组。A.阴性对照组；B.JNK抑制剂；C.p38抑制剂；D.ERK1/2抑制剂；E.ERK1/2抑制剂+Bullatacin 25 μg/mL；F.p38抑制剂+Bullatacin 25 μg/mL；G.JNK抑制剂+Bullatacin 25 μg/mL；H.Bullatacin 25 μg/mL；I.MAPK激动剂Anisomycin 0.1 μg/mL；J.Bullatacin 25 μg/mL+Anisomycin 0.1 μg/mL 48 h。培养48 h，收集细胞，按照流式用细胞凋亡检测试剂盒的使用说明逐步完成检测。
2.4 Western Blot检测Bullatacin对A549细胞MAPK通路的调节作用
分组同“2.2”项，收集对数生长的A549细胞，加入细胞裂解液，冰上放置15 min，13 000 r/min离心10 min，取上清液，以Bradford法作蛋白定量后置-80 ℃贮存备用。灌制10%SDS2聚丙烯酰胺凝胶，常规电泳，转膜，封闭。一抗(1∶400)，4 ℃孵育过夜，二抗(1∶5000)，室温孵育2 h，ECL显色。β-actin检测作为内对照，进行细胞间蛋白表达的比较。
3 统计学方法
采用SPSS11.5统计软件进行分析。实验数据均以—x±s表示。成组设计多个样本均数比较采用方差分析，多个样本均数间每2个均数比较采用t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
4 结果
4.1 Bullatacin对A549细胞增殖的影响
MTT法检测不同浓度Bullatacin给药24、48、72 h后 ......
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