补阳还五汤精简方对局灶性脑缺血大鼠脑谷胱甘肽抗氧化系统的影响(2)
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参见附件。
2.5 大鼠脑组织γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶蛋白表达测定
取100 mg脑组织，按说明书提取并测定蛋白含量，取蛋白样品与4×SDS凝胶上样缓冲液混合后煮沸变性，SDS-PAGE电泳分离，湿转至PVDF膜上，用含5%脱脂奶粉的TBS溶解封闭。再分别与羊抗大鼠GAPDH抗体(1∶1500)、羊抗大鼠γ-GCS抗体(1∶200)4 ℃反应过夜，TBST溶液洗3次。然后与HRP标记的二抗(1∶1000)室温孵育，以增强型HRP-DAB底物显色试剂盒显影。将膜进行扫描，图像分析软件测定目的条带的积分光密度值(IOD)，以GAPDH为内参照，以目的条带IOD值与GAPDH条带IOD值的比值作为该蛋白的相对表达量。
3 统计学方法
采用SPSS17.0统计软件进行分析。所有实验数据均经过方差齐性检验和正态性检验，计量资料用—x±s表示，相同时间点的比较采用独立样本t检验或方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
4 结果
4.1 补阳还五汤及其精简方对大鼠脑组织还原型谷胱甘肽含量、谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响
与假手术组比较，模型组大鼠各个时间点脑组织GSH含量及GSH-Px活性明显降低(P<0.01，P<0.05)。随着动物生存时间延长，模型组指标有上升趋势，提示动物体内有一定的自身抗氧化作用。与模型组比较，各给药组第3日GSH含量及GSH-Px活性明显升高(P<0.05)，精简方组第7日GSH-Px活性与同时点模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。
4.2 补阳还五汤及其精简方对大鼠脑组织γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶基因表达的影响
假手术组中γ-GCS mRNA呈少量表达，模型组第1日γ-GCS mRNA表达为应激性增多(P<0.05)，这一结果提示早期缺血性脑损伤使GSH含量下降，而引发与GSH结合的γ-GCS的释放增加有关 ......
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