糖网明目颗粒对糖尿病大鼠视网膜病变防治作用及机制研究(2)
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2.3 糖尿病大鼠视网膜微血管形态观察
采用视网膜消化铺片法检测。将190只大鼠随机分为实验组(175只)和空白组(15只)，适应性喂养1周，禁食过夜12 h，次日称重、测空腹血糖。除空白组外，其余大鼠按55 mg/kg体质量腹腔注射STZ(1%， 0.1 mol/L、pH4.6柠檬酸盐缓冲液配制，避光冰上保存，15 min内给药)。给药3 d后，禁食6～8 h，测空腹血糖，空腹血糖>16.7 mmol/L为造模成功，血糖<16.7 mmol/L者再次注射STZ，3 d 后测空腹血糖，合并2次造模成功大鼠均衡使用。空白组大鼠仅予腹腔注射等体积柠檬酸缓冲液。
将造模成功大鼠按体质量和空腹血糖随机分为模型组(25只)、传统工艺组(22只)及新工艺组(22只)。传统工艺组及新工艺组大鼠灌服等临床剂量的颗粒剂蒸馏水混悬液，模型组和空白组大鼠灌服等体积蒸馏水，每日1次，持续灌胃12周，每周测空腹血糖，每日测体质量。正常饲料喂养，自由摄水和饮食。末次给药后各组大鼠禁食12 h，3.5%水合氯醛10 mL/kg体质量腹腔注射麻醉，腹主动脉取血制备血清， -80 ℃保存备用；用生理盐水经腹主动脉灌注冲干净其中血液，以4%多聚甲醛腹主动脉灌流固定后，摘取带有视神经的眼球，以注射器针头扎孔，置于4%多聚甲醛中固定48～72 h制作视网膜消化铺片血管标本。
视网膜消化铺片：将大鼠眼球以流水冲洗10 min，放入盛有PBS的玻璃皿中，于睫状体后部经锯齿缘环形剪开巩膜，去除眼前节部分；将后眼杯以视乳头为中心桔瓣样切成3块，轻轻分离出视网膜；PBS漂洗10 min，甘氨酸缓冲液浸泡过夜；3%胰蛋白酶(蒸馏水配制)37 ℃空气浴振荡器中消化2～4 h；将视网膜转移到PBS中，用吸管将视网膜多次反复轻吹、吸打将内界膜去除；移入蒸馏水中漂洗与振荡多次仅剩下一层透明的视网膜血管网；漂取并平铺于载玻片 ......
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