四妙散对尿酸诱导人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子及骨形成蛋白—7表达的影响(2)
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2.5 细胞免疫组化检测
将清洁灭菌盖玻片置于6孔板中，每孔接种细胞悬液(约105 cells/mL)2 mL，培养24 h后，换成无血清培养液培养24 h进行同步化，然后将细胞按照上述分组加入不同培养液，继续培养24 h。取出细胞爬片，用PBS漂洗，2 min×3次。4%多聚甲醛室温固定20 min后进行细胞免疫化学检测。步骤如下：0.5%TritionX- 100室温处理20 min，PBS漂洗后，3%H2O2室温孵育10 min灭活内源性过氧化酶活性，PBS漂洗，柠檬酸高温抗原修复，正常山羊血清孵育20 min封闭非特异结合位点，兔抗人CTGF、BMP-7抗体工作液4 ℃过夜， PBS漂洗后相继与二抗及SABC试剂各孵育20 min，PBS漂洗，最后DAB显色和苏木素复染，乙醇梯度脱水后中性树胶封片。显微镜观察细胞形态并随机选取3个视野拍照，应用Image-Pro Plus软件测量区域内平均积分光密度值(IOD)。
3 统计学方法
采用SPSS19.0统计软件进行分析。计量资料以—x±s表示，组间比较采用非配对t检验，多组间比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
4 结果
4.1 四妙散对尿酸诱导的人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子、骨形成蛋白-7基因表达的影响
实时荧光定量PCR结果显示：尿酸诱导后，促纤维化因子CTGF mRNA表达显著升高，BMP-7 mRNA表达显著下降，与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05)。药物血清干预后，高、中、低剂量组CTGF mRNA表达降低，高、中、低剂量组BMP-7 mRNA表达升高(P<0.05)，高、中剂量组与低剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结果见表2。
4.2 四妙散对尿酸诱导的人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子、骨形成蛋白-7蛋白表达的影响
CTGF、BMP-7均表达于胞质中 ......
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