不同针刺刺激量对寒凝证类痛经大鼠子宫微循环及其相关物质的影响(1)
摘要：目的 从子宫微循环角度探讨不同针刺刺激量对寒凝证类痛经大鼠的针刺效应。方法 动情间期3月龄SD雌性大鼠32只，采用随机数字法分为盐水组、模型组、刺激量A组和刺激量B组，每组8只。采用全身冷冻结合苯甲酸雌二醇注射法造模，刺激量A组予粗针深刺加手法干预，刺激量B组予细针浅刺不施手法。观察各组子宫毛细血管、微血管管径及血浆血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)含量。结果 与盐水组比较，模型组5、10、20、30 min各时点毛细血管管径明显缩小(P<0.01)，5、10、20、30、40 min各时点微血管管径明显缩小，血浆6-keto-PGF1α含量明显降低、TXB2/6-keto-PGF1α明显升高(P<0.01)。与模型组比较，刺激量A组5、10、20、30 min各时点毛细血管管径明显扩张(P<0.05)，5、10、20、30、40 min各时点微血管管径明显扩张，血浆6-keto-PGF1α含量明显升高、TXB2/6-keto-PGF1α明显降低(P<0.05，P<0.01)；刺激量B组在20、30 min微血管管径明显扩张(P<0.05)，血浆TXB2/6-keto-PGF1α明显降低(P<0.05)。与刺激量B组比较，刺激量A组5、10、20、30 min各时点毛细血管管径明显扩张(P<0.05)，5、10、20、30、40 min各时点微血管管径明显扩张(P<0.01)。结论 寒凝证类痛经大鼠存在明显的子宫微循环障碍及循环相关物质的紊乱。A、B刺激量均能改善痛经时子宫微循环，其机制可能与恢复失衡的TXB2及6-keto-PGF1α相关。
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关键词：不同针刺刺激量；寒凝证类痛经大鼠；子宫微循环；血栓素B2；6-酮-前列腺素-F1α
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.03.014
中图分类号：R245 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2015)03-0051-05
研究表明，原发性痛经患者存在一定程度的子宫微循环障碍，常表现为子宫动脉血流减少、血流阻力增大及血液淤滞等[1-2]。前列环素(PGI2)和血栓素A2 (TXA2)是具有强烈血管舒缩作用的循环相关物质，与痛经关系密切。针刺对人体体表及内脏微循环均存在显著的调节作用[3-5]，而针刺达到一定刺激量是针灸取得疗效的重要前提和关键因素。三阴交为肝、脾、肾三经交汇穴，为治疗痛经要穴。本研究选择针刺“三阴交”观察寒凝痛经状态下大鼠子宫微循环及其相关物质的变化，以及不同针刺刺激量对大鼠子宫微循环及其相关物质的影响，以期从子宫微循环的角度部分揭示不同针刺刺激量对寒凝证类痛经针刺效应的影响。
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1 实验材料
1.1 动物
清洁级雌性SD大鼠，3月龄，体质量(240±20)g，购自中国人民解放军军事医学科学院，许可证号SCXK(军)2007-004。大鼠置于清洁柜中，以普通大鼠饲料喂养，室内温度(23±1)℃，湿度(45±5)%，日光灯光照，自由饮用自来水。适应性饲养3 d，在此过程中，对大鼠进行阴道筛查，选择动情间期的大鼠32只，纳入实验。
1.2 主要仪器与针具
BC/BD-379HB卧式冰柜(青岛海尔集团)，TX51显微镜(日本Olympus公司)，H8-202显微镜(日本尼康)，XW-B-3冷光源微循环显微检查仪(南京盛光光电医疗仪器有限责任公司)，SG-H1型恒温恒湿实验系统(南京盛光光电医疗仪器有限责任公司)，0.25 mm×40 mm和0.18 mm×13 mm两种规格针灸针(北京中研太和医药有限公司)。
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1.3 主要药物与试剂
苯甲酸雌二醇注射液，宁波市三生药业有限公司，批号120207；缩宫素注射液，上海禾丰制药厂生产，批号120302；20%乌拉坦注射液，批号T20080530；美兰染色溶液自制。
2 实验方法
2.1 分组
选择处于动情间期的3月龄SD雌性大鼠32只，按照随机数字法分为盐水组、寒凝证类痛经模型组(模型组)、刺激量A组和刺激量B组，每组8只。
2.2 造模
模型组、刺激量A组和刺激量B组采用全身冷冻结合苯甲酸雌二醇注射法造模[6]，每日给予大鼠腹部皮下注射苯甲酸雌二醇注射液，连续10 d，第1、10日0.5 mg/只，第2～9日0.2 mg/只，末次给药后1 h，腹腔注射缩宫素2 U/只，第1-5日在给药后放入-25 ℃冰柜冷冻4 h，中途(2 h)打开冰柜换气5 s。盐水组每日给予注射等量生理盐水。
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2.3 取穴
依据《实验针灸学》[7]动物穴位定位标准，“三阴交”位于大鼠后肢内踝尖上10 mm。
2.4 针刺方法
刺激量A组采用0.25 mm×40 mm毫针刺入大鼠“三阴交”4～5 mm，且刺入即刻和留针10 min时分别施平补平泻手法30 s；刺激量B组采用0.18 mm×13 mm毫针刺入大鼠“三阴交”1～2 mm，不施手法。
2.5 子宫微循环检测
造模结束后，给予20%乌拉坦麻醉大鼠，于腹部正中线外约0.5 cm处做一纵行长约2～3 cm的开口，拉出一侧子宫及其韧带，下端距离子宫角0.5 cm，上端距离卵巢约1 cm，将其固定好，置于微循环恒温恒湿箱中，用XW-B-3冷光源微循环显微检查仪，于40倍光镜在固定视野内观察造模成功后5、10、20、30、40 min时点大鼠子宫外膜微血管(11～100 μm)和毛细血管(≤10 μm)管径。微血管和毛细血管管径的测量均以视野中血管中央为基线，用微尺在基线上下测量3次，取平均值。
2.6 血浆血栓素B2及6-酮-前列腺素-F1α含量检测, 百拇医药(章庆庆 朱世鹏 罗丽 郭孟玮 张玲 申松希 齐丹丹 杨佳敏 沈小雨 许咏思 王洋)
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关键词：不同针刺刺激量；寒凝证类痛经大鼠；子宫微循环；血栓素B2；6-酮-前列腺素-F1α
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.03.014
中图分类号：R245 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2015)03-0051-05
研究表明，原发性痛经患者存在一定程度的子宫微循环障碍，常表现为子宫动脉血流减少、血流阻力增大及血液淤滞等[1-2]。前列环素(PGI2)和血栓素A2 (TXA2)是具有强烈血管舒缩作用的循环相关物质，与痛经关系密切。针刺对人体体表及内脏微循环均存在显著的调节作用[3-5]，而针刺达到一定刺激量是针灸取得疗效的重要前提和关键因素。三阴交为肝、脾、肾三经交汇穴，为治疗痛经要穴。本研究选择针刺“三阴交”观察寒凝痛经状态下大鼠子宫微循环及其相关物质的变化，以及不同针刺刺激量对大鼠子宫微循环及其相关物质的影响，以期从子宫微循环的角度部分揭示不同针刺刺激量对寒凝证类痛经针刺效应的影响。
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1 实验材料
1.1 动物
清洁级雌性SD大鼠，3月龄，体质量(240±20)g，购自中国人民解放军军事医学科学院，许可证号SCXK(军)2007-004。大鼠置于清洁柜中，以普通大鼠饲料喂养，室内温度(23±1)℃，湿度(45±5)%，日光灯光照，自由饮用自来水。适应性饲养3 d，在此过程中，对大鼠进行阴道筛查，选择动情间期的大鼠32只，纳入实验。
1.2 主要仪器与针具
BC/BD-379HB卧式冰柜(青岛海尔集团)，TX51显微镜(日本Olympus公司)，H8-202显微镜(日本尼康)，XW-B-3冷光源微循环显微检查仪(南京盛光光电医疗仪器有限责任公司)，SG-H1型恒温恒湿实验系统(南京盛光光电医疗仪器有限责任公司)，0.25 mm×40 mm和0.18 mm×13 mm两种规格针灸针(北京中研太和医药有限公司)。
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1.3 主要药物与试剂
苯甲酸雌二醇注射液，宁波市三生药业有限公司，批号120207；缩宫素注射液，上海禾丰制药厂生产，批号120302；20%乌拉坦注射液，批号T20080530；美兰染色溶液自制。
2 实验方法
2.1 分组
选择处于动情间期的3月龄SD雌性大鼠32只，按照随机数字法分为盐水组、寒凝证类痛经模型组(模型组)、刺激量A组和刺激量B组，每组8只。
2.2 造模
模型组、刺激量A组和刺激量B组采用全身冷冻结合苯甲酸雌二醇注射法造模[6]，每日给予大鼠腹部皮下注射苯甲酸雌二醇注射液，连续10 d，第1、10日0.5 mg/只，第2～9日0.2 mg/只，末次给药后1 h，腹腔注射缩宫素2 U/只，第1-5日在给药后放入-25 ℃冰柜冷冻4 h，中途(2 h)打开冰柜换气5 s。盐水组每日给予注射等量生理盐水。
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2.3 取穴
依据《实验针灸学》[7]动物穴位定位标准，“三阴交”位于大鼠后肢内踝尖上10 mm。
2.4 针刺方法
刺激量A组采用0.25 mm×40 mm毫针刺入大鼠“三阴交”4～5 mm，且刺入即刻和留针10 min时分别施平补平泻手法30 s；刺激量B组采用0.18 mm×13 mm毫针刺入大鼠“三阴交”1～2 mm，不施手法。
2.5 子宫微循环检测
造模结束后，给予20%乌拉坦麻醉大鼠，于腹部正中线外约0.5 cm处做一纵行长约2～3 cm的开口，拉出一侧子宫及其韧带，下端距离子宫角0.5 cm，上端距离卵巢约1 cm，将其固定好，置于微循环恒温恒湿箱中，用XW-B-3冷光源微循环显微检查仪，于40倍光镜在固定视野内观察造模成功后5、10、20、30、40 min时点大鼠子宫外膜微血管(11～100 μm)和毛细血管(≤10 μm)管径。微血管和毛细血管管径的测量均以视野中血管中央为基线，用微尺在基线上下测量3次，取平均值。
2.6 血浆血栓素B2及6-酮-前列腺素-F1α含量检测, 百拇医药(章庆庆 朱世鹏 罗丽 郭孟玮 张玲 申松希 齐丹丹 杨佳敏 沈小雨 许咏思 王洋)