1.5.3 Western blot检测Caspase3蛋白表达 细胞裂解后按产品说明用BCA法测定蛋白浓度，等量的蛋白样品(40 μg)经10%SDS-PAGE电泳分离后，转印至PVDF膜上，5%脱脂奶粉封闭液室温封闭2 h，鼠抗人β-actin一抗按1∶5000稀释，兔抗人Caspase3一抗按1∶1000稀释，4 ℃孵育过夜；TBST洗膜3次后，加入1∶2000稀释的HRP标记羊抗鼠或羊抗兔二抗，室温孵育1 h，TBST再次洗涤3次，加入ECL发光底物，在凝胶成像系统中成像、摄图。重复3次。

    1.6 统计学方法

    采用SPSS19.0统计软件进行分析。计量资料以—x±s表示，对细胞OD值进行曲线拟合，计算IC50；Levene法检验方差齐性，方差齐单因素多水平比较采用Dunnett-t检验，各药物浓度组在不同时点的细胞OD值比较采取重复测量的两因素多水平方差分析；方差不齐，采用多样本非参数Kruskal-Wsllis H检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

    2 结果

    2.1 消痰散结方对HCT116细胞增殖的影响

    消痰散结方作用72 h ......