破布木果基因组DNA不同提取方法比较研究(2)
3 mol/L醋酸钠、氯仿-异戊醇(24∶1,V/V)、苯酚-氯仿(1∶1,V/V)、无水乙醇为分析纯,TE缓冲液。破布木果购于新疆麦迪森维药有限公司饮片厂,经新疆自治区中医医院李永和主任药师鉴定为破布木Cordia dicholoma Forst.f.的干燥成熟果实。
2 方法与结果
2.1 破布木果基因组DNA提取
2.1.1 改良CTAB法 参照文献[9]方法改良。①取样品0.15 g,在预冷的研钵中捣碎,加入1 mL研磨液,迅速研磨成糊状;②均匀移入3个1.5 mL离心管中,加入2×CTAB提取液200 μL,混匀,65 ℃水浴保温1 h,每隔10 min震荡1次;③在4 ℃条件下,12 000 r /min 离心10 min,吸取上清液,加入等体积的氯仿-异戊醇(24∶1,V/V)抽提3次,10 000 r/min离心5 min;④取上清液,加2/3体积的无水乙醇,混匀后-20 ℃放置1 h沉淀,4 ℃、10 000 r/min离心5 min;⑤弃上清液,得到DNA絮状沉淀;⑥沉淀物用80%乙醇和无水乙醇分别漂洗2次,室温晾干,加50 μL TE缓冲液溶解,4 ℃保存备用。
2.1.2 改良SDS法 参考文献[5]方法改良 ......
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