2 方法

    2.1 植物蛋白提取

    采用康为世纪植物蛋白提取试剂盒(货号CW2033)，按照植物蛋白提取说明书进行操作。

    2.2 BCA法测定蛋白浓度

    参照文献[5]方法。稀释牛血清白蛋白(BSA)标准品配制方法见表1。配制BCA工作液：BCA工作液总量=(BSA标准品样本个数+待测样品)×复孔数×每个样本BCA工作液体积。将稀释好的A～G管BSA标准品和待测蛋白样品各25 μL分别加到作好标记的96孔板微孔中，每个样本做2～3个平行反应。每孔加入BCA工作液200 μL，充分混匀，盖上96孔板盖，37 ℃孵育30 min。冷却至室温。用酶标仪在540～590 nm范围内测定每个样品及BSA标准品吸光值。绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。蛋白浓度检测范围：20～2000 μg/mL。

    表1 BSA标准品的配制

    管号稀释液(μL)BSA标准品(μL)BSA标准品终浓度(μg/μL)

    A01002

    B2002001

    C200200(从B管中取)0.5

    D200200(从C管中取)0.25

    E200200(从D管中取)0.125

    F200200(从E管中取)0.062 5

    G20000

    2.3 蛋白完整性检测

    2.3.1 灌制5%分离胶 ①选择浓度5%PAGE分离胶 ......