解毒化瘀方药物血清与药物血浆对模型PC12细胞蛋白酶活化受体—1、细胞外信号调节激酶1/2表达的影响(2)
1 实验材料1.1 动物
SPF级SD大鼠32只,5周龄,体质量180~200 g,雌雄各半,湖南斯莱克景达实验动物有限公司,许可证号SCXK(湘)2013-0005。饲养于室温18~20 ℃、湿度65%~70%环境,自由饮水饮食。
1.2 实验细胞
PC12细胞,来源于大鼠的肾上腺嗜铬细胞瘤细胞,高分化、永生性,长沙赢润生物技术有限公司,编号2015032007。
1.3 药物及制备
解毒化瘀方(黄连9 g,黄芩6 g,黄柏6 g,栀子9 g,红花9 g,川芎12 g,赤芍12 g,地龙9 g)饮片购自湖南省中医药研究院附属医院中药房。第1次加4倍量蒸馏水,煎煮1 h,滤出煎液,第2次加2倍量蒸馏水,煎煮30 min,合并2次煎液,过滤浓缩至2 g/mL原药材药液,4 ℃冰箱保存备用。
1.4 主要试剂与仪器
DMEM高糖培养基,美国HyClone公司;胰蛋白酶,Sango公司;链霉素青霉素混合溶液(100 U/mL青霉素、100 g/L链霉素)、磷酸盐缓冲液(PBS ......
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