2.5 RT-qPCR检测结肠癌SW480细胞磷脂酶A2和环氧合酶2 mRNA表达

    从Gene Bank网站获取PLA2、COX-2基因序列，并使用Premier5.0软件设计引物(见表1)，引物由上海生工生物工程有限公司合成。采用Trizol试剂提取细胞总RNA，每份样品均取2 μg，按试剂盒说明进行反转录。以Tubulin为内参，PLA2、COX-2表达的相对定量值用于统计分析。

    2.6 Western blot检测结肠癌SW480细胞磷脂酶A2和环氧合酶2蛋白表达

    用含有蛋白酶抑制剂的RIPA裂解并收集细胞总蛋白，BCA法检测蛋白浓度后加入上样缓冲液，煮沸变性。样品进行SDS-PAGE电泳，电转移至PVDF膜上。5%脱脂奶粉封闭2 h后，特异性一抗4 ℃摇床过夜，洗膜后，二抗孵2 h，EC显影。

    2.7 shRNA转染实验

    人结肠癌SW480细胞分为PLA2 shRNA干扰组、质粒对照组、对照组，每组设3个复孔。以2 μg PLA2 shRNA质粒和对照质粒分别转染SW480细胞，转染24 h后，用5 μg/μL嘌呤霉素筛选细胞株，继续培养24 h。对照组为不加任何处理的SW480细胞。

    3 统计学方法

    采用SPSS16.0统计软件进行分析 ......