2.3 Western blot检测HK-2细胞蛋白表达

    根据MTT实验结果，将对数生长期HK-2细胞分为5组，正常组加3 mL正常培养液，其余4组加3 mL含10 ng/mL TGF-β1培养液，24 h后吸出培养基，正常组更换正常培养液，诱导组换为含10 ng/mL TGF-β1培养液，中药低剂量组换为含10 ng/mL TGF-β1+化瘀降浊汤250 μg/mL培养液，中药中剂量组换为含10 ng/mL TGF-β1+化瘀降浊汤500 μg/mL培养液，中药高剂量组换为含10 ng/mL TGF-β1+化瘀降浊汤1000 μg/mL培养液。24 h后吸出培养基，磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤1次，无酶细胞消化液消化细胞后用RIPA提取总蛋白，BCA法蛋白定量，10%SDS-聚丙烯凝胶电泳分离，转移到聚偏二氟乙烯膜上，脱脂奶粉封闭膜1 h，加一抗(E-cadherin、Smad3、Snail稀释倍数为1∶5000)，4 ℃孵育过夜，洗涤缓冲液清洗3次×10 min，加二抗(稀释倍数为1∶8000) ......