2.5 双向凝胶电泳

    2.5.1 蛋白质样品制备与纯化 水迷宫测试结束后，将各组大鼠断头处死，冰上去除颅骨后，迅速取出脑组织，分离出皮层及海马组织，精确称重。将各组大鼠皮层和海马组织放入组织匀浆器中，加1.5 mL双向电泳组织裂解液[含7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4%CHAPS、40 mmol/L Tris、65 mmol/L DTT和0.5%(V/V)Bio-Lyte，pH 3～10]，匀浆处理，冰上静置裂解20 min，液氮反复冻融3次，加RNase 50 ?g/mL、DNase 200 ?g/mL，4 ℃放置10 min，冰水混合物中进行超声破碎(100 W，工作3 s，间歇2 s，15个循环)，8000 r/min离心10 min×2次，去除未溶解杂质，再以12 000 r/min离心10 min，吸取上清液即为总蛋白溶液。采用Bradford法测定提取的蛋白质浓度，分装后-70 ℃冰箱贮存备用或直接用于双向电泳。

    2.5.2 双向电泳 2-DE参照Bio-Rad双向电泳指南进行 ......