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编号:12863648
辣椒素对大细胞肺癌NCI—H460细胞凋亡线粒体的影响(2)
http://www.100md.com 2016年8月1日 《中国中医药信息》 2016年第8期
     2.5 免疫荧光检测

    取对数生长期NCI-H460细胞,实验组细胞100、200、300 ?mol/L辣椒素处理,37 ℃、5%CO2及饱和湿度下培养24 h,对照组除未加辣椒素外,其余条件与实验组完全一致。待细胞爬满爬片,取出,PBS冲洗2次,3.7%低聚甲醛固定30 min,PBS冲洗2次,5%BSA室温封闭15 min,0.2%TritonX-100处理15 min,然后与抗Cyt c小鼠单克隆抗体(1∶50稀释)一起于37 ℃、5%CO2及饱和湿度下培养1 h。PBS冲洗2次,加入FITC 标记山羊抗小鼠IgG二抗(1∶400稀释),37 ℃、5%CO2及饱和湿度下培养30 min,DAPI处理10 min,LSM510 META激光共聚焦显微镜观察荧光信号。每组设6个平行孔。

    2.6 Western blot检测

    取对数生长期NCI-H460细胞,将实验组细胞用终浓度为100、200、300 ?mol/L辣椒素,37 ℃、5%CO2及饱和湿度下培养24 h ......
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