2.7 Western blot检测Toll样受体2、4蛋白表达

    ①组织匀浆，提取总蛋白。BCA法检测蛋白含量并将蛋白浓度统一为4 μg/mL后变性待用。②凝胶。根据分子量大小确定分离胶的浓度，待其凝固后再加入浓缩胶，待胶凝固后加样。③跑胶。浓缩胶为80 mA恒压电泳35 min，分离胶为180 mA电泳55 min。④转膜。蛋白凝胶在180 mA条件下转膜100 min，将胶上蛋白转到PVDF膜上，5%脱脂奶粉溶液常温下封闭2 h。⑤一抗孵育。按一抗稀释比例稀释摇床混匀，4 ℃孵育过夜，TBST溶液洗膜8 min×3次。⑥二抗孵育。摇床60 min，TBST溶液洗膜8 min×3次。⑦加入发光液后曝光显影。⑧用Image J软件分析目的条带和β-actin的积分光密度值，并计算二者的比值作为目的蛋白的相对表达量。

    3 统计学方法

    采用SPSS17.0统计软件进行分析。实验数据以—x±s表示，根据方差齐性检验结果，多组间比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。

    4 结果

    4.1 结肠黏膜损伤状况及评分结果

    肉眼观察结显示 ......