柱前衍生HPLC—UV法测定人工牛黄中猪去氧胆酸含量(2)
2.2.3 衍生试剂溶液 精密称取2-萘基溴甲基酮63.5 mg于25 mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度。2.2.4 催化剂溶液 取三乙胺35.5 μL于10 mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度。
2.3 衍生化反应
取人工牛黄提取液,定容于1 mL容量瓶中,氮气吹干。加入催化剂溶液0.1 mL、衍生试剂溶液0.75 mL,用甲醇定容至刻度,60 ℃水浴反应50 min后冷却到室温,加甲醇至刻度,按“2.1”项下色谱条件测定反应产物的峰面积。
2.4 方法学考察
2.4.1 专属性试验 取催化剂溶液0.1 mL、衍生试剂溶液0.75 mL于1 mL容量瓶中后用甲醇定容到刻度,按“2.1”项下色谱条件记录色谱图与人工牛黄衍生化反应后的色谱图进行对比,见图1、图2。衍生试剂及催化剂对衍生产物无干扰,专属性良好。
2.4.2 线性关系考察 分别取猪去氧胆酸标准溶液0.005、0.01、0.02、0.05、0.07、0.1 mL于1 mL容量瓶中。按“2.3”项下条件进行衍生化反应,按“2.1”项下色谱条件测定反应产物峰面积。以峰面积对猪去氧胆酸质量作图 ......
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