4.1.1 稳定细胞系的构建 将构建的带有红色荧光标签的重组质粒pmCherry-C1-MrgX2转染HEK-293 细胞，经G418筛选后共获得46个单细胞克隆。用10 ?g/mL阳性激动剂进行刺激，通过钙流方法检测激活钙流信号强弱挑选MrgX2高表达克隆，共挑选得到16株阳性单克隆细胞系。最终挑选信号值最稳定、最强的6号单克隆作为高通量筛选的稳定细胞系，命名为HEK293/MrgX2，转入400 ?g/mL G418进行后续研究。

    4.1.2 细胞系功能性与稳定性验证 为了应用HEK/MrgX2重组过表达细胞系进行MrgX2受体激动剂的筛选，首先应通过阳性激动剂C48/80以及拮抗剂2-APB进行细胞系功能性和实用性验证。由图1A可知，C48/80对细胞系具有明显的激动作用且表现出明显的剂量依赖效应，EC50为2.7 ?g/mL，2-APB是 MrgX2的抑制剂，可阻断其通道的功能，抑制钙离子的通过。由图1B可知，其对由C48/80引起的钙流信号具有明显的抑制作用且IC50为46.29 ?mol/L，结果与文献报道基本一致[6，9]。随后，为检测重组细胞系HEK293/MrgX2的稳定性 ......