1.5.5 RT-PCR检测GRP94基因表达 RNA提取后再用紫外分光光度计及琼脂糖凝胶电泳的方法进行RNA浓度测定。然后进行cDNA制备，加RNA 1 μg，5×RT Buffer 4 μL，RNA Ace 0.5 μL，RNase Inhibitor 0.5 μL，dNTPs 2 μL，Oligo(dT)1 μL，补1‰DEPC水至20 μL。反应条件：42 ℃，10 min；30 ℃，20 min；99 ℃，5 min；4 ℃，5 min。依据GenBank上所查mRNA序列，采用Gene tool软件设计引物，内参GAPDH上游5'-ACCCCGTGCTGCTGACCGAG-3'，下游5'-TCCCGGCCAGCCAGGTCCA-3'；GRP94上游5'-GCGGCGGATTAAGGAAGATG-3'，GRP94下游5'-CTTCTGCGTCTTCTGAGGTGTCT-3'，扩增产物长度152 bp。再加cDNA 2 μL，GRP94上游引物0.5 μL，GRP94下游引物0.5 μL，2×SYBR Green10 μL，H2O 7 μL，共20 μL ......