淫羊藿苷对大鼠骨髓间充质干细胞迁移作用的影响(2)
2.4 Hoechst33342染色各组细胞经体外缺糖缺氧处理24 h后,弃去培养液,用0.01 mol/L PBS漂洗3次,加入4%多聚甲醛固定20 min,0.01 mol/L PBS漂洗3次后加入Hoechst33342染色液,室温孵育10 min,0.01 mol/L PBS漂洗3次,磷酸甘油封片,荧光显微镜下观察细胞核的形态。每孔随机选取5个视野,分别计数凋亡和全部细胞数。实验重复5次,计算细胞凋亡率。细胞凋亡率(%)=凋亡细胞数÷细胞总数×100%。
2.5 Western blot检测CXCR4蛋白表达
实验分为对照组和0.01、0.1、1 μmol/L淫羊藿苷组。将MSC接种至6孔板中,不同浓度淫羊藿苷处理48 h,吸去上清液,经0.01 mol/L PBS漂洗3次,每孔加200 μL预冷的含PMSF的RIPA裂解液,充分裂解细胞后12 000 r/min离心15 min,取上清液。BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。取各组蛋白30 μg ......
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