2.5 细胞周期检测

    将人肝癌HepG2肿瘤干细胞用胰酶替代物消化，无血清培养液重悬，计数，稀释为5×103/mL，3 mL/孔接种于6孔板中。待细胞稳定成球，将各孔悬浮细胞培养液转移至离心管中，1500 r/min离心5～10 min，吸弃原培养液，PBS冲洗1遍，加入无血清培养基进行同步化。24 h后按上述方法离心，吸弃无血清培养基，按照分组给药。药物作用48 h后，将各组细胞培养液收集到离心管中。1000×g离心3～5 min，沉淀细胞。吸除上清，加入约1 mL冰浴预冷的PBS重悬细胞，并转移至1.5 mL离心管中。再次离心沉淀细胞，弃上清，加入1 mL冰浴预冷的70%乙醇，轻轻吹打均匀，4 ℃固定，过夜。离心，沉淀细胞，弃上清液，用1 mL冰浴PBS冲洗1遍。每管细胞样品中加入0.5 mL碘化丙啶染色液，缓慢并充分重悬细胞，37 ℃避光温浴30 min，24 h内流式细胞仪检测。

    2.6 细胞凋亡检测

    将人肝癌HepG2肿瘤干细胞用胰酶替代物消化，无血清培养液重悬，计数，稀释为5×103/mL，3 mL/孔接种于6孔板中 ......