2.2 细胞毒性试验

    细胞被接种至96孔板中，每孔100 μL，密度为2×105个/mL，置于温箱培养24 h，将培养基更换为无血清培养基饥饿6 h，干预72 h，将96孔板中培养基换为含有10 μL CCK-8无血清培养基100 μL，继续孵育2～2.5 h，于酶标仪波长450 nm处测定光密度(OD)值。

    2.3 RT-PCR检测

    细胞以不同因素处理后，弃去培养基，Trizol法提取细胞总RNA，紫外分光光度法测定其含量与纯度。取大约5 μL总RNA反转录为cDNA。以GAPDH为内参，应用20 μL体系进行PCR扩增。反应条件：94 ℃、2 min，1个循环；94 ℃、40 s，25～35个循环；50～65 ℃、40 s，72 ℃、1 min，72℃、5 min，1个循环。

    2.4 Western blot检测

    细胞裂解液冰上裂解细胞10 min，手机并提取蛋白。校正GAPDH后，每组以校正后体积进行10%SDS-PAGE凝胶电泳，后将蛋白以100 V、90 min转移至PVDF膜上，用一抗封闭液(1∶1000)进行封闭，然后用TBST洗膜 ......