斑马鱼血栓模型在中药抗血栓活性筛选中的适用性研究(2)
2 实验方法2.1 胚胎收集
成年斑马鱼由本实验室参照文献[6-7]方法养殖,温度控制在(28.5±1)℃,明暗周期14 h/10 h,定时喂养刚孵出的丰年虾。收集胚胎前1晚,挑选健康性成熟的斑马鱼,按雌雄1∶2比例放入交配缸内,次日清晨获得胚胎,用胚胎培养水将胚胎进行清洗后,放入28 ℃恒温控光培养箱内,每日更换胚胎培养水2次。
2.2 样品制备
2.2.1 胚胎培养水 按照文献[6]的标准配制。
2.2.2 单体成分 精密称取丹酚酸B 15 mg,溶于胚胎培养水中,获得3000 μg/mL的样品母液,给药前再用胚胎培养水稀释至不同浓度。
2.2.3 单味中药 根据含丹参成方制剂的制备过程中丹参的常用提取方法进行制备[8]。取丹参饮片粉碎,过40目筛,称取2份100 g粉末,分别加入10倍量水、95%乙醇,回流提取2次,每次2 h,过滤,合并提取液,减压浓缩,真空干燥。精密称取2种提取物各30 mg,溶于0.03 mL DMSO,再加胚胎培养水9.97 mL,获得3000 μg/mL样品母液,给药前再用胚胎培养水稀释成不同浓度的溶液,并保证筛选体系中DMSO终体积分数不高于0.1%[9] ......
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