苏木、川芎对PG—BE1干细胞样细胞标志蛋白ABCG2影响的体内研究(3)
2.3.4 Western blot检测细胞ABCG2、SOX-2、Nanog、OCT-4表达 分别收集PG-BE1贴壁细胞及第3代PG-BE1球细胞,提取蛋白。BCA法测定各组总蛋白浓度,分别制备浓缩胶与分离胶,加样后分别行蛋白电泳、电转移,5%脱脂奶粉封闭后,一抗(稀释倍数1∶1000)、二抗(稀释倍数2∶1000)孵育各1 h,暗室中滴加超敏发光液,凝胶成像系统拍照。2.4 川芎、苏木对裸鼠模型抑瘤率的影响
将1×107/mL浓度PG-BE1球细胞接种于裸鼠腋下,0.2 mL/只,24 h后,连续给药21 d,小鼠脱颈处死,称量瘤质量,计算抑瘤率。抑瘤率(%)=(实验组平均瘤质量-对照组平均瘤质量)÷对照组平均瘤质量×100%。
2.5 激光共聚焦检测瘤体内ABCG2蛋白表达
将肿瘤组织从液氮中取出,冷冻切片包埋剂包埋,置于-20 ℃冰冻切片机中待其凝固;将已凝固肿瘤组织进行粗切片,直至露出肿瘤组织为止,切取8 μm厚度、完整的组织切片 ......
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