1.8 延髓5-羟色胺受体2B蛋白表达测定

    采用Western blot方法。取出保存的延髓组织，称重后研钵中倒入液氮，研碎组织块后移入EP管中，加RIPA蛋白裂解液、蛋白酶抑制剂Aprotinin，裂解后取上清液置于EP管内，冰上保存，将各样品蛋白液1∶50稀释，参照BCA蛋白定量试剂盒进行蛋白测定，每个样品取相同质量蛋白，加5×loading buffer后沸水煮10 min使其变性；将制备好的10%凝胶板放入电泳槽内，倒入1×Running Buffer，用细枪头加样，确定加样顺序并计算加样量；将电泳槽与电源连接好，以90 V稳压状态电泳，当溴酚蓝进入分离胶时将电壓调整至100 V，待溴酚蓝电泳至分离胶底部停止电泳；按方向依次放好滤纸、胶、膜，直至整个夹板保持紧密，含5%脱脂奶粉的TBS封闭，室温封闭4 h；结合一抗，4 ℃过夜，5-HTR2B(1∶1000)，室温漂洗3次，每次10 min；结合二抗，室温结合2 h，羊抗鼠二抗(1∶10 000)、羊抗兔二抗(1∶10 000)，室温漂洗3次，每次10 min，最后1次用TBS漂洗以去除吐温；化学发光，于暗室中曝光操作，梯度曝光10～300 s。

    1.9 统计学方法

    采用SAS9.3统计软件进行分析 ......