2.3.2 样品处理

    将细胞培养板从培养箱内取出，吸弃含药培养液，用4 ℃ HBSS快速清洗3遍，加入胰蛋白酶消化后以完全培养基终止消化，收集细胞悬液，1000 r/min离心5 min，弃去上清液，加入4 ℃ HBSS 500 ?L重悬细胞，1000 r/min离心5 min，弃去上清液，加入500 ?L RIPA细胞裂解液裂解细胞，吹打混匀，超声处理(250 W，25 kHz)25次，20 s/次(冰上操作)，12000 r/min离心5 min，所得上清液一部分以BCA法測定蛋白定量，另一部分加入3倍甲醇，涡旋1 min，12 000 r/min离心10 min，氮气吹干，加50 ?L甲醇复溶，涡旋1 min，12 000 r/min离心10 min，取上清液20 ?L，采用HPLC测定芹菜素含量，记录峰面积。芹菜素的细胞内摄取量以?g(药物)/mg(蛋白)表示[6]。

    2.3.3 影响因素考察

    细胞培养14 d，吸去培养液，用HBSS清洗3次 ......