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编号:13229297
不同电针刺激强度对糖尿病胃轻瘫大鼠胃肠运动及饥饿素的影响(3)
http://www.100md.com 2018年5月1日 《中国中医药信息杂志》 2018年第5期
     1.5 血糖测定

    每周尾静脉采血,血糖仪和血糖试纸测定血糖。

    1.6 胃排空率测定

    治疗结束后第2日大鼠给予2 mL酚红溶液灌胃,20 min后处死,取大鼠全胃。测定方法参照文献[9],计算大鼠胃排空率。胃排空率(%)=(1-实测酚红OD值÷标准酚红OD值)×100%。

    1.7 小肠推进率测定

    将取出的小肠铺于白纸上,测量幽门至回盲部全长及幽门至酚红所到距离,取两者比值即为小肠推进率(酚红在小肠中移行距离÷小肠全长×100%)。

    1.8 血清饥饿素含量测定

    大鼠麻醉腹主动脉采血,血液标本置于非抗凝管中,常温静置20 min,4 ℃、3000 r/min离心10 min,收集上清液,将上清液冷冻置于-20 ℃或-80 ℃冰箱保存。ELISA检测饥饿素,严格按照试剂盒说明书进行操作。

    1.9 下丘脑饥饿素mRNA表达测定

    采用实时荧光定量PCR测定。大鼠处死后断头,取大鼠下丘脑。取脑组织约0.02 g,加入1 mL Trizol研磨匀浆,加三氯甲烷震荡,离心,加等体积异丙醇静置。低温离心后弃上清保留沉淀,加乙醇震荡。低温离心,弃上清液,加无菌无酶水溶解沉淀。吸取2 μL RNA溶液运用紫外分光光度计于波长260、280 nm处测定吸光度,计算其浓度、纯度。用相对定量2-ΔΔCt法分析结果,ΔCt=各样本目的基因Ct值-各样本β-actin的Ct值 ......
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