香砂六君子汤对慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜核因子—κB p65活化水平及其介导炎性级联反应的影响(3)
2.6 Western blot检测胃黏膜组织核因子-κB p65的蛋白表达常规提取组织蛋白,BCA试剂盒进行蛋白定量,20 μg/道上样量进行SDS-PAGE电泳,转至PVDF膜后,5%牛血清白蛋白封闭后分别加入一抗。GAPDH一抗溶液(1∶700)配制:GAPDH一抗10 μL,牛奶封闭液7 mL;NF-κB p65一抗溶液(1∶750)配制:NF-κB p65一抗1 μL,封闭液7.5 mL。4 ℃摇床过夜,洗涤后加入HRP标记羊抗兔二抗。辣根酶标记山羊抗兔(1∶7500)二抗溶液配制:山羊抗兔二抗2 μL,牛奶封闭液15 mL。室温孵育1 h,采用化学发光底物进行化学发光,暗室曝光显影,定影后用Bio-RAD Quantity one图像分析软件进行扫描分析。
3 统计学方法
采用SPSS17.0统计软件进行分析。实验数据以—x±s表示,组间比较用方差分析,方差齐用S-N-K法比较,方差不齐用Tamhane’s T2法比较。P<0.05表示差异有统计学意义。
4 结果
4.1 一般状况
空白组大鼠始终表现为反应灵敏 ......
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