2.5 Western blot检测细胞核内β-catenin蛋白表达

    收集细胞，用冰预冷的PBS洗涤细胞，3000 r/min离心2 min，弃上清液。加300 μL CER試剂，反复吹打混匀，冰上裂解15 min，4 ℃、800 r/min离心5 min，弃上清液，加300 μL NER，重悬沉淀，4 ℃、4000 r/min离心5 min，弃上清，再次冰上裂解15 min，4 ℃、800 r/min离心5 min，弃上清液，加50～80 μL Suspension Buffer重悬沉淀，得核蛋白。经电泳及转膜后加入含5 g/100 mL脱脂奶粉的TBST，封闭60 min，加入β-catenin一抗(稀释比例1∶200)，4 ℃过夜，TBS-T洗3次后将稀释的二抗(HRP标记，稀释比例1∶4000)与膜共同孵育45～60 min。TBS-T洗3次后，采用化学发光试剂曝光显影。

    2.6 PCR检测细胞c-myc、cyclinD1 mRNA表达

    收集细胞，Trizol提取各组细胞总RNA，紫外分光光度计测定总RNA浓度，以组织总mRNA为模板，反转录成cDNA，反转录反应体系20 μL：3 μL RNA，2 μL Random primer ......