2.5 血浆样品中丹酚酸B含量测定

    2.5.1 色谱条件

    同“2.1.1”项下色谱条件。

    2.5.2 血浆处理方法

    精密吸取200 ?L血浆，放入离心管中，加入内标对香豆酸20 ?L、2 mol/L盐酸30 ?L，涡旋振荡60 s，加入乙酸乙酯2 mL，涡旋振荡90 s，12 000 r/min离心5 min，吸取上清液，精密吸取上层有机溶剂，常温条件下氮气吹干，用甲醇100 ?L复溶，涡旋20 s，12 000 r/min离心5 min，取20 ?L上清液进样测定。

    2.5.3 方法学考察

    2.5.3.1 专属性考察

    在上述色谱条件下，对空白血浆、空白血浆+丹酚酸B对照品及空白血浆+丹酚酸B对照品+内标对香豆酸分别进样检测，色谱图见图3。对香豆酸、丹酚酸B的出峰时间分别为9.5、12.9 min。内标与丹酚酸B色谱峰互不干扰，峰形良好，无杂峰干扰，基线平稳。

    2.5.3.2 线性关系考察

    取空白血浆200 ?L，加内标20 ?L，分别加不同浓度的丹酚酸B对照品标准液，按血浆处理方法，配成血浆中含0.25、0.5、1、2、4、8 ?g/mL的标准溶液。以丹酚酸B和对香豆酸峰面积比值为纵坐标，丹酚酸B血药浓度为横坐标，作标准曲线，得回归方程：Y=0.244 3X-0.007 2 ......