组织总RNA提取与质量检测及反转录合成模板cDNA：取适量各样本组织，分别取1 μL各组织RNA 样品用核酸定量分析仪测定其OD260/OD280均在1.8～2.0，经总RNA琼脂糖凝胶电泳检测，提取的RNA符合纯度要求，可用于后续PCR。按反转录试剂盒要求操作，所得单链cDNA置于-20 ℃冰箱保存备用。 实时荧光定量PCR以U6作为内参基因，miRNA-146a-5p引物序列为：5'-TGAGAACTGAATT CCATGGGTT-3'，通过融解曲线分析，为单一峰，说明PCR扩增特异性较好，样本3次重复实验数据的重复性较好，得到各扩增反应的Ct值。连续检测荧光并记录扩增曲线，采用样点拟合法分析结果得到目的基因和U6的Ct值，用相对定量2-ΔΔCt法对待测miRNA进行分析。

    1.8 生物信息学分析

    采用miRDB对miRNA-146a-5p靶基因进行预测。并运用miRTarBase(该数据库收录了文献报道的、有实验证据的microRNA与靶基因关系)对结果进行分析。用DAVID(https：//david.ncifcrf.gov/home.jsp)在线工具进行GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析 ......