2.6 Western blot检测核因子E2相关因子2蛋白表达

    收集各实验组细胞进行裂解，按试剂盒操作说明书于低温条件下提取细胞核蛋白，测定蛋白浓度，取50 ?g蛋白质样品进行SDS-PAGE，电泳结束后转至PVDF膜上；室温低速振荡封闭1 h后(封闭液采用5%脱脂奶粉)，用TBST(含0.05% Tween-20的TBS缓冲液)温和振荡漂洗3次×15 min；加入兔抗大鼠Nrf2单克隆抗体，稀释倍数为1∶200，4 ℃过夜，TBST洗膜3次后加入二抗(1∶500)室温振荡孵育3 h，读膜采用Odyssey红外荧光扫描成像系统，进行半定量分析处理。

    3 统计学方法

    采用SSPS17.0统计软件进行分析。实验数据以—x±s表示，各组间比较用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。

    4 结果

    4.1 肝豆灵药物血清对体外高铜负荷小鼠神经干细胞增殖的影响

    与空白对照组比较，模型组小鼠NSC内Nrf2细胞增殖率明显降低(P<0.01)；与模型组比较，肝豆灵各剂量组小鼠NSC细胞增殖率明显升高(P<0.01)。结果见表1。

    4.2 肝豆灵药物血清对体外高铜负荷小鼠神经干细胞内活性氧水平的影响

    与空白对照组比较，模型组小鼠NSC内ROS明显升高(P<0.01)；与模型组比较 ......