基于CXCR4启动子的中药有效成分高通量筛选细胞模型构建和应用(3)
293-CXCR4单克隆细胞以1×104/mL铺于96孔板,待细胞汇合度约90%~95%后无血清培养,加入候选中药单体(8 μg/mL),参考Lan T H等[8]报道,将人参皂苷Rb1作为阳性对照药物,不加入任何药物作为阴性对照组。作用24 h 后,用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性值。将所测得数值与阴性对照组的荧光素酶活性值相比,阳性对照组和候选药物组荧光素酶活性值为比较后的相对值。2.7 异体间充质干细胞分离培养
应用差速贴壁法分离骨髓中MSCs。将SD大鼠拉颈处死,用75%乙醇浸泡消毒8 min,分离双侧股骨和胫骨。剔除骨组织周围组织后,暴露骨髓腔,用10 mL注射器抽取PBS冲洗骨髓腔,将带有骨髓细胞的PBS收集于10 mL离心管,1000 r/min离心10 min。弃上清液,用含10%胎牛血清、1%青-链霉素的DMEM培养液重悬细胞,以5×105个/mL密度均匀接种于25 cm2培养瓶中,置37 ℃、5%CO2细胞培养箱中培养。第3日更换培养液后继续培养 ......
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