新疆石榴皮HPLC指纹图谱研究(1)
摘要：目的 建立新疆石榴皮HPLC指纹图谱。方法 采用Agilent SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0.1%三氟乙酸溶液，梯度洗脱，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃，检测波长370 nm，进样量10 μL，测定12批石榴皮样品，运用相似度分析软件建立石榴皮指纹图谱共有模式，并对色谱峰进行指认。结果 建立了石榴皮HPLC指纹图谱，標定了18个共有峰，3个色谱峰得到指认，分别为α-安石榴苷、β-安石榴苷、鞣花酸。结论 本研究建立的石榴皮HPLC指纹图谱方法稳定可行，可用于控制石榴皮质量。
关键词：石榴皮;指纹图谱;高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2019)04-0074-04
石榴Punica granatum L.为石榴科Punicaceae石榴属Punica L.落叶灌木或小乔木，别名安石榴[1]。石榴原产于地中海及亚洲西部地区，约公元前2世纪传入我国。目前，我国栽培石榴主要有六大产区，新疆是我国最西部的石榴产区，种植主要分布在喀什、和田等地。石榴是一种药食同源的植物资源，其叶、花、汁、籽、果皮、根皆可入药。研究表明，石榴具有清除自由基、调节血脂、预防心脑血管疾病、抗氧化、抗病毒、抗癌及改善妇女围绝经期综合征等多种生理和药理活性[2]。石榴皮在食品、医药等领域有巨大的
基金项目：新疆维吾尔自治区中医民族医药科技人才项目(2016-3-10);新疆维吾尔自治区高校科研计划项目(XJEDU2017S021)
通讯作者：高晓黎，E-mail：xli_g@sina.com
应用价值[3-5]，从1963年起收载入《中华人民共和国药典》，用于治疗久泻、久痢、便血、脱肛、崩漏、白带和虫积腹痛。
石榴皮含有多酚、黄酮、氨基酸、微量元素等多种化学成分。石榴多酚是石榴皮中多酚羟基化合物的总称，主要存在于石榴果皮中，约为其干质量的10.4%～21.3%，主要成分包括安石榴苷、没食子酸、表儿茶素、石榴皮鞣素等，其中安石榴苷含量最高[4-5]。安石榴苷是目前发现仅存在于石榴多酚中的特异性成分，也是其主要的单一成分，约占石榴皮总酚含量的65.75%，远高于鞣花酸和石榴皮鞣素等成分，安石榴苷在体内外均具有很强的抗氧化、抗癌、抗菌及抗动脉粥样硬化等作用[6-7]。本试验综合运用相似度评价、主成分分析方法，对石榴皮进行HPLC指纹图谱研究，为其质量控制提供参考。
1 仪器与试药
Agilent1220LC型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，AB135-S型电子天平(瑞士梅特勒公司)，HH-S4数显恒温水浴锅(江苏金怡仪器科技有限公司)，KQ5200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，功率200 W，频率40 kHz)。
安石榴苷对照品(批号MUST-17052603，纯度≥98.12)、鞣花酸对照品(批号MUST-18030601，纯度≥99.65)，成都曼斯特生物科技有限公司;色谱甲醇，三氟乙酸。12批石榴皮样品(2015年10月采集，S1、S2、S3产地为和田策勒县，S4、S5、S6产地为和田皮山县，S7、S8、S9产地为喀什市，S10、S11、S12产地为喀什叶城县)经新疆医科大学药学院帕丽达·阿不力孜教授鉴定，均为石榴科植物石榴Punica granatum L.的成熟干燥果皮。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为Agilent SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为0.1%三氟乙酸-甲醇，梯度洗脱(0～10 min，5%甲醇;10～25 min，20%甲醇;25～35 min，45%甲醇;35～45 min，65%甲醇)，检测波长370 nm，流速1 mL/min，进样量10 μL，柱温30 ℃。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取适量安石榴苷、鞣花酸对照品，置棕色容量瓶中，甲醇溶解并定容、摇匀，制成每1 mL各含75 ?g的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
精密称定25 mg石榴皮，置容量瓶中，精密加入25 mL甲醇，称定质量，超声处理20 min，放室温至冷，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀混合，精密吸取5 mL至10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀混合，过0.22 μm微孔有机滤膜，即得。
2.4 样品测定
精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，按“2.1”项下条件进样，记录45 min色谱图。
2.5 方法学考察
2.5.1 精密度试验
取“2.3”项下供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测得各色谱峰相对保留时间RSD均小于0.26%，相对峰面积RSD均小于3.0%，表明仪器精密度良好。
2.5.2 稳定性试验
取“2.3”项下供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别于0、2、4、6、8、10、12、24 h进样，测得各色谱峰相对保留时间RSD均小于0.30%，相对峰面积RSD均小于3.0%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.5.3 重复性试验
按“2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，按“2.1”项下条件分析，测得各色谱峰相对保留时间RSD均小于0.5%，相对峰面积RSD均小于3.0%，表明该方法重复性良好。, http://www.100md.com(常占瑛 刘桂花 王梅 古丽巴合尔?卡吾力 布鲁根)
关键词：石榴皮;指纹图谱;高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2019)04-0074-04
石榴Punica granatum L.为石榴科Punicaceae石榴属Punica L.落叶灌木或小乔木，别名安石榴[1]。石榴原产于地中海及亚洲西部地区，约公元前2世纪传入我国。目前，我国栽培石榴主要有六大产区，新疆是我国最西部的石榴产区，种植主要分布在喀什、和田等地。石榴是一种药食同源的植物资源，其叶、花、汁、籽、果皮、根皆可入药。研究表明，石榴具有清除自由基、调节血脂、预防心脑血管疾病、抗氧化、抗病毒、抗癌及改善妇女围绝经期综合征等多种生理和药理活性[2]。石榴皮在食品、医药等领域有巨大的
基金项目：新疆维吾尔自治区中医民族医药科技人才项目(2016-3-10);新疆维吾尔自治区高校科研计划项目(XJEDU2017S021)
通讯作者：高晓黎，E-mail：xli_g@sina.com
应用价值[3-5]，从1963年起收载入《中华人民共和国药典》，用于治疗久泻、久痢、便血、脱肛、崩漏、白带和虫积腹痛。
石榴皮含有多酚、黄酮、氨基酸、微量元素等多种化学成分。石榴多酚是石榴皮中多酚羟基化合物的总称，主要存在于石榴果皮中，约为其干质量的10.4%～21.3%，主要成分包括安石榴苷、没食子酸、表儿茶素、石榴皮鞣素等，其中安石榴苷含量最高[4-5]。安石榴苷是目前发现仅存在于石榴多酚中的特异性成分，也是其主要的单一成分，约占石榴皮总酚含量的65.75%，远高于鞣花酸和石榴皮鞣素等成分，安石榴苷在体内外均具有很强的抗氧化、抗癌、抗菌及抗动脉粥样硬化等作用[6-7]。本试验综合运用相似度评价、主成分分析方法，对石榴皮进行HPLC指纹图谱研究，为其质量控制提供参考。
1 仪器与试药
Agilent1220LC型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，AB135-S型电子天平(瑞士梅特勒公司)，HH-S4数显恒温水浴锅(江苏金怡仪器科技有限公司)，KQ5200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，功率200 W，频率40 kHz)。
安石榴苷对照品(批号MUST-17052603，纯度≥98.12)、鞣花酸对照品(批号MUST-18030601，纯度≥99.65)，成都曼斯特生物科技有限公司;色谱甲醇，三氟乙酸。12批石榴皮样品(2015年10月采集，S1、S2、S3产地为和田策勒县，S4、S5、S6产地为和田皮山县，S7、S8、S9产地为喀什市，S10、S11、S12产地为喀什叶城县)经新疆医科大学药学院帕丽达·阿不力孜教授鉴定，均为石榴科植物石榴Punica granatum L.的成熟干燥果皮。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为Agilent SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为0.1%三氟乙酸-甲醇，梯度洗脱(0～10 min，5%甲醇;10～25 min，20%甲醇;25～35 min，45%甲醇;35～45 min，65%甲醇)，检测波长370 nm，流速1 mL/min，进样量10 μL，柱温30 ℃。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取适量安石榴苷、鞣花酸对照品，置棕色容量瓶中，甲醇溶解并定容、摇匀，制成每1 mL各含75 ?g的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
精密称定25 mg石榴皮，置容量瓶中，精密加入25 mL甲醇，称定质量，超声处理20 min，放室温至冷，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀混合，精密吸取5 mL至10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀混合，过0.22 μm微孔有机滤膜，即得。
2.4 样品测定
精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，按“2.1”项下条件进样，记录45 min色谱图。
2.5 方法学考察
2.5.1 精密度试验
取“2.3”项下供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测得各色谱峰相对保留时间RSD均小于0.26%，相对峰面积RSD均小于3.0%，表明仪器精密度良好。
2.5.2 稳定性试验
取“2.3”项下供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别于0、2、4、6、8、10、12、24 h进样，测得各色谱峰相对保留时间RSD均小于0.30%，相对峰面积RSD均小于3.0%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.5.3 重复性试验
按“2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，按“2.1”项下条件分析，测得各色谱峰相对保留时间RSD均小于0.5%，相对峰面积RSD均小于3.0%，表明该方法重复性良好。, http://www.100md.com(常占瑛 刘桂花 王梅 古丽巴合尔?卡吾力 布鲁根)