2.5 TMT蛋白质组学分析

    2.5.1 样品蛋白提取及胰酶酶解

    水迷宫实验结束后，模型组和天芪益智颗粒高剂量组大鼠腹腔注射10%水合氯醛(4 mL/kg)麻醉并处死，冰上快速分离脑组织，用预冷的生理盐水冲洗干净。每组分别随机选取3只大鼠脑组织，将皮层和海马组织样本中加入适量裂解液(8 mol/L尿素，100 mmol/L Tris，1×蛋白酶抑制剂，pH 8.5)中，涡旋混匀，超声破碎5 min，使蛋白完全溶解，蛋白悬浮液4 ℃、15 000×g离心10 min，取上清分装后冻存于-80 ℃冰箱。采用Bradford法测定蛋白溶液的蛋白浓度。使用胰蛋白酶进行蛋白酶切，将酶切样品溶液加入脱盐柱中进行脱盐处理。

    2.5.2 TMT标记

    各组蛋白样品脱盐后，使用TMT标记试剂盒进行标记。标记的样品是大鼠的脑组织，从每组中随机选择3只大鼠进行生物学复制，将所有大鼠脑组织样品混合，用作重复实验的内标。将TEAB缓冲液、TMT标签和干粉状态下的样品从-20 ℃转移至室温下平衡 ......