双丹明目胶囊抑制人脐静脉内皮细胞增殖有效成分筛选研究(2)
1 材料与方法1.1 药物和细胞株
所有标准品均购自中国食品药品检定研究院,于使用前用甲醇溶解,并用培养基稀释成所需浓度。HUVEC购自武汉普诺赛生命科技有限公司。
1.2 主要试剂与仪器
RPMI1640培养基、胎牛血清、胰酶,美国Gibco公司;MTT粉末,上海碧云天生物技术研究所。CO2培养箱、MK3型酶标仪,美国Thermo公司;5417R低温高速离心机,德国Eppendorf公司;高内涵细胞成像系统,美国PerkinElmer公司;流式细胞仪,美国BD公司。
1.3 细胞培养
HUVEC用含10%胎牛血清RPMI1640培养基,37 ℃、5%CO2饱和湿度培养,每隔2~3 d胰酶消化并传代,定时更换培养液。
1.4 MTT法检测细胞存活率
细胞经胰酶消化,调整细胞浓度,8000个/孔接种于96孔板,待细胞完全贴壁后,弃去培养液。配制不同终浓度待测组分溶液,药物组每孔加100 μL,同时设置空白组(调零组)和对照组 ......
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