糖痛方对糖尿病神经病变大鼠坐骨神经自噬相关蛋白Beclin-1和LC3Ⅱ表达的影响(3)
糖痛方对糖尿病神经病变大鼠坐骨神经自噬相关蛋白Beclin-1和LC3Ⅱ表达的影响,3统计学方法,4结果,5讨论
2.4.2 qRT-PCR检测Beclin-1和LC3Ⅱ基因表达按Trizol试剂盒说明提取总RNA，1.2%琼脂糖凝胶电泳，反转录按HiFiScript cDNA第一链合成试剂盒说明书进行操作。反应体系：SYBR FAST QPCR Kit Master Mix(2×)5 μL，上游引物F(10 μmol/L)0.2 μL，下游引物R(10 μmol/L)0.2 μL，cDNA模版1 μL。PCR扩增条件：95 ℃、3 min;95 ℃、3 s;60 ℃、20 s，40个循环。引物设计见表1。
2.4.3 透射电镜观察坐骨神经超微结构
大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉，截取右侧坐骨神经。取1 mm3左右2.5%戊二醛固定，1%锇酸后固定，乙醇丙酮梯度脱水，Epon812包埋，超薄切片，厚度为50～70 nm，乙酸双氧铀和枸橼酸铅双染色，透射电镜观察有髓鞘神经纤维脱髓鞘及细胞质的病理改变并摄片 ......
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