扁蒴藤素对肺纤维化模型小鼠肺组织形态及转化生长因子-β1、α-平滑肌肌动蛋白表达的影响(3)
2.4 免疫组化检测肺组织转化生长因子-β1和α-平滑肌肌动蛋白表达取肺组织切片，二甲苯和梯度乙醇常规脱蜡，PBS冲洗，滴加H2O2阻断内源性过氧化氢酶，柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复，滴加山羊血清覆盖组织，分别滴加一抗TGF-β1(1∶200)及α-SMA(1∶500)，放入湿盒，4 ℃过夜。PBS冲洗后分别滴加反应增强液、二抗，DAB染色，苏木精复染，饱和碳酸锂返蓝，中性树脂封片。于正置显微镜200倍镜下观察TGF-β1及α-SMA表达，拍照并记录。使用全自动ImagePro- Plus 6.0计算软件对免疫组化染色结果进行分析。
2.5 Western blot检测转化生长因子-β1和α-平滑肌肌动蛋白表达
称取肺组织20 mg，加入300 μg蛋白裂解液，匀浆后抽提总蛋白，BCA法测定蛋白浓度，按30 μg/孔上样，进行SDS-PAGE电泳，电泳结束后将凝胶移至PVDF膜上。5%脱脂奶粉40 mL室温封闭2 h，TBST洗膜3次×10 min。按抗体说明书分别配制TGF-β1一抗(1∶1000)及α-SMA一抗(1∶1000) ......
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