刘春雷，胡开治，刘燕琴，曹敏，唐祥友，陈艾萌

    1.重庆市药物种植研究所，特色生物资源研究与利用川渝共建重点实验室，重庆 408435；2.四川省内江市农业科学院，四川 内江 641000

    栀子Ellis为茜草科栀子属常绿灌木，以干燥成熟果实入药，具有泻火除烦、清热利湿、凉血解毒等功效，主产于江西、浙江、四川、重庆、福建、湖南等地。栀子果实富含栀子苷、西红花苷等成分，具有保肝利胆、抗炎、保护心脑血管系统等作用，不仅是许多药品的原料药，还可从中提取黄色素，作为天然的食品着色剂，具有巨大的药用及经济价值。随着市场需求的不断增加，各地开始无序发展，引种混乱，导致其亲缘关系十分复杂。遗传育种工作的核心是创造、重组遗传变异，因此育种工作的成效取决于种质遗传变异的水平，关于栀子种质资源的遗传多样性分析已有报道，但由于各研究者选用的栀子群体有所差别或种类不全，其种间、种内显示的多态性并不完全一致，分析结果存在一定矛盾。同时由于缺乏基因组数据，稳定、可靠的分子标记较少，极大限制了栀子遗传育种的研究。

    SSR(simple sequence repeats)也称微卫星DNA，是以少数几个核苷酸(1～6个)为单位重复、总长度数十碱基对的串联重复序列。与其他分子标记相比，SSR具有分布均匀、特异性高、多态性信息含量丰富等特点，而且呈共显性遗传，符合孟德尔遗传定律，已广泛用于遗传图谱构建、分子标记辅助育种、种质资源鉴定等方面。目前有关栀子SSR标记的开发国内外报道非常有限，Xu等利用文库富集法开发了22对多态性SSR引物，Deng等利用转录组序列开发25对具有多态性的SSR引物，还有一些学者也利用转录组序列进行了SSR分析，但没有进行验证。本研究以课题组完成的栀子基因组序列为基础，采用生物信息学方法开发SSR引物，并对不同居群栀子的遗传多样性水平及种群结构进行分析评价，以期为栀子资源开发利用和分子辅助育种提供参考和依据。

    1 仪器与试药

    C1000 TouchPCR仪(美国伯乐公司)，DYCZ-30Z垂直电泳仪(北京六一生物科技有限公司)，Power B3000电源(美国伯乐公司)，Thermo Scientific Pico 21离心机(赛默飞世尔科技有限公司)，NanoDropOne超微量紫外分光光度计(赛默飞世尔科技有限公司)。

    植物基因组DNA快速提取试剂盒(货号DE221-50T)、2×Taq Master Mix(货号SL2610)、琼脂糖(货号CA1341)，北京酷来搏科技有限公司；聚丙烯酰胺凝胶制备试剂盒(货号P1340-50T) ......