淫羊藿苷对激素抵抗型肾病综合征大鼠足细胞PODXL/Ezrin蛋白及Caspase-3、Bax、Bcl-2表达的影响
肾小球,批号,1实验材料,1动物,2药物,3主要试剂与仪器,2实验方法,1造模,分组及给药,2标本采集,3肾功能指标测量,4肾组织病理学检测
王晓辉,戴恩来,段淑文,刘灿,丁照然甘肃中医药大学,甘肃 兰州 730000
激素抵抗型肾病综合征(steroid resistant nephrotic syndrome,SRNS)是一种临床表现为对标准类固醇治疗缺乏反应的疾病[1],其特点是类固醇抵抗性、临床变异性和遗传异质性[2]。目前未见经过验证的生物标志物能预测SRNS或定义调节SRNS的途径[3]。SRNS治疗困难,易发展为终末期肾病,生存率低,迫切需要逆转类固醇耐药性及减少长期使用高剂量类固醇药物的措施[4]。SRNS发病机制伴随肾小球上皮细胞(足细胞)凋亡[5-6],因此,抑制足细胞凋亡是SRNS一种潜在的治疗策略。淫羊藿苷(icariin,ICA)在神经退行性疾病、心血管疾病、抗骨质疏松、抗炎、抗氧化应激、抗抑郁和抗肿瘤等方面有多种药理作用[7-9],对肾脏疾病具有保护作用,在提高糖皮质激素疗效方面有一定优势[10],但其机制有待进一步探索。在前期研究基础上,本研究进一步观察ICA对足细胞相关蛋白及凋亡的影响,探讨其减轻足细胞损伤的作用机制。
1 实验材料
1.1 动物
雄性SPF级SD大鼠60只,体质量(180±20)g,购自斯贝福(北京)生物技术有限公司,动物生产许可证号SCXK(京)2019-0010。饲养于甘肃中医药大学动物实验中心,温度22 ℃,湿度30%~50%,辐照灭菌SPF级大鼠饲料及饮用水喂养。本研究经甘肃中医药大学实验动物管理(伦理)委员会审批(2021-181)。
1.2 药物
ICA,陕西博林生物技术有限公司,批号BL20211102001。泼尼松片,山东鲁抗医药集团赛特有限责任公司,批号211007。盐酸阿霉素(ADR),北京索莱宝科技有限公司,批号HY-15142。
1.3 主要试剂与仪器
Caspase-3抗体(批号GTX110543)、Bax抗体(批号GTX635715)、Bcl-2抗体(批号GTX100064)、Ezrin抗体(批号GTX111709),美国Gene Tex公司;PODXL抗体(批号bs-1345R),北京博奥森生物技术有限公司;β-actin(批号GB12001)、HRP标记山羊抗兔二抗(批号GB23303),武汉赛维尔生物科技有限公司;TUNEL试剂盒(批号G1501),武汉赛维尔公司;CCB法尿蛋白检测试剂盒(货号C035-2-1),南京建成生物工程研究所。7600-1101SE型全自动血液生化分析仪(日立诊断产品有限公司) ......
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